血型交叉配血

1、,血型與交叉配血,主要內(nèi)容：,紅細(xì)胞血型概述抗體檢查和鑒定交叉配血方法日常工作中問題對策,血型的發(fā)現(xiàn),1900年，奧地利科學(xué)家蘭德斯坦納,紅細(xì)胞,血清,凝集,不凝集,,,,遇到,紅細(xì)胞抗原,血型系統(tǒng)（Blood group systems）29 245血型集合（ Blood group collections）6 12血型系列（series）： 低頻率系列（700 series，low-incidence

2、 antigens) 33 高頻率系列 (901 serise,high-incidence antigens) 12,,Rh血型系統(tǒng),Du比正常D陽性細(xì)胞抗原弱，但一旦輸給Rh陰性的受血者后，自然有免疫產(chǎn)生抗D的可能。同時Du型人者接受Rh陽性的細(xì)胞后，也有可能產(chǎn)生抗D抗體。 作為供血者，Du型歸類為Rh陽性， 作為受

3、血者Du型歸類為Rh陰性者。,紅細(xì)胞抗體(1),預(yù)期抗體：若已知紅細(xì)胞ABO血型，按 Landsteiner´s法則可預(yù)知的ABO血型 抗體，即抗-A和抗-B。 預(yù)期抗體也叫做規(guī)則抗體意外抗體：抗-A或抗-B以外的抗體。在ABO亞型 中，變異的抗-A1或某種抗-B等抗體， 也稱為意外抗體。 意外抗體過去

4、也叫做不規(guī)則抗體,紅細(xì)胞抗體(2),天然抗體：沒有可察覺的抗原刺激，而機(jī)體對抗原免疫應(yīng)答的產(chǎn)物。天然抗體多為IgM抗體，能與含有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞結(jié)合，在鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)，所以也叫鹽水抗體。IgM抗體的最適反應(yīng)溫度為0-25℃。免疫抗體：抗原刺激機(jī)體而產(chǎn)生的。免疫抗體多為IgG抗體，在鹽水介質(zhì)中只能致敏含有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，但不產(chǎn)生凝集，需要采用抗球蛋白搭橋、酶處理細(xì)胞或聚凝胺介導(dǎo)等方法，才能產(chǎn)生凝集反應(yīng)。IgG抗體的

5、最適反應(yīng)溫度為37℃。,免疫血液學(xué)的傳統(tǒng)方法,凝集實(shí)驗(yàn)和溶血實(shí)驗(yàn)玻片法/試管法/微孔板法抗人球?qū)嶒?yàn),在抗原抗體反應(yīng)中的去離子和低離子,鹽水凝集法：例如，ABO血型鑒定試驗(yàn) 包括玻片法、試管 法和微孔法但靈敏度相對較低，只在一些基層醫(yī)院血庫使用低離子強(qiáng)度鹽水法： 通過降低介質(zhì)溶液離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞膜外圍的離子云，促進(jìn)紅細(xì)胞凝集，因而其靈敏度有所提高。,聚凝胺試驗(yàn),原理：聚凝胺是一種高價陽

6、離子季胺鹽多聚物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞之間距離減小，能引起正常紅細(xì)胞可逆性的非特異性凝聚。如果是抗體致敏的紅細(xì)胞，加入中和液后，凝集不可逆；無抗體致敏的紅細(xì)胞，加入中和液后，凝集解散。程序：按試劑盒說明書操作。,聚凝胺凝集法： 通過多聚季氨鹽溶液提供大量正電荷來中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，減少紅細(xì)胞間的排斥，促進(jìn)紅細(xì)胞凝集，其靈敏度有較大提高。此方法目前在國內(nèi)使用較多。（Rh,Duffy）

7、,抗人球試驗(yàn) - 檢測 IgG,,抗人球試驗(yàn)： 在鹽水凝集法或低離子強(qiáng)度鹽水法的基礎(chǔ)上，加入抗人球蛋白抗體，通過抗人球蛋白抗體的特異性橋連作用，促進(jìn)紅細(xì)胞的凝集?？煞譃橹苯雍烷g接抗人球試驗(yàn)。 K, k, Fya, Fyb, JKa, JKb, Kpa, Kpb, S, s, Lua, Lub,間接抗人球蛋白試驗(yàn)(IAT),經(jīng)典IATLISS-IAT:試管法 卡PEG-IAT酶－IAT聚凝胺－IAT,經(jīng)典IAT,程

8、序：2滴血清、1滴2-5%的紅細(xì)胞，37℃孵育45-60分鐘，生理鹽水洗滌3遍后傾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白試劑，離心后判讀結(jié)果。用抗體致敏的紅細(xì)胞檢測試驗(yàn)結(jié)果的正確性。,LISS-IAT,原理：通過降低紅細(xì)胞周圍的離子氛，使抗體易于接近抗原，促進(jìn)抗體在更短的時間內(nèi)致敏紅細(xì)胞，再使用抗人球蛋白試劑，使被致敏的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集程序：2滴血清、1滴2-5%的紅細(xì)胞，加2-4滴LISS液后混勻，37℃孵育15分鐘，離心觀察細(xì)胞的凝集情

9、況，用生理鹽水洗滌3遍后傾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白試劑，離心后判讀結(jié)果。,PEG-IAT,原理：PEG（聚乙二醇）是一種水溶性的中性多聚體，當(dāng)含有抗原與相應(yīng)抗體的溶液中加入PEG時，由于空間排斥效應(yīng)作用，使溶液中的抗體飽和度提高，加速溶液中的抗原-抗體復(fù)合物的形成。程序：2滴血清、1滴2-5%的紅細(xì)胞，加4滴PEG溶液后混勻，37℃孵育15分鐘，生理鹽水洗滌3遍后傾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白試劑，離心后判讀結(jié)果。,微柱

10、凝膠技術(shù)(卡),原理：微管內(nèi)有凝膠顆粒和試劑。凝膠顆粒具有分子篩作用，離心后，不凝集的紅細(xì)胞通過全程進(jìn)入微管底部，而凝集的紅細(xì)胞則懸浮停留在顆粒中。程序：按廠家說明操作,反應(yīng)原理 微柱凝膠免疫反應(yīng)的本質(zhì)是紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，也可稱之微柱凝膠血凝試驗(yàn)（Microcolumn Gel Heamagglutination Assay，MGHA）在微柱凝膠管中，紅細(xì)胞和相應(yīng)抗體結(jié)合后，形成紅細(xì)胞凝集團(tuán)塊。在一定離心力下，該凝集團(tuán)

11、塊位于膠表面或膠中；而紅細(xì)胞未和相應(yīng)抗體結(jié)合，仍為分散的紅細(xì)胞，在同樣的離心力下，紅細(xì)胞沉降到微柱管尖底部。,4+ 紅細(xì)胞復(fù)合物（凝集）位于凝膠表面3+ 大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠表面，少部分位于凝膠中部2+ 大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠中部，少部分位于凝膠中上部1+

12、 紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠中下部± 與同一卡中陰性管結(jié)果對照，如與陰性結(jié)果有差別，即為±— 紅細(xì)胞完全沉積在凝膠管尖底部完全溶血 凝膠和液體無凝集或未凝集的紅細(xì)胞，液體出現(xiàn)透明清澈紅色不完全溶血 殘留紅細(xì)胞在膠表面、

13、膠中或膠底部，液體出現(xiàn)透明清澈紅色混合凝集 紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠表面和凝膠底部,,反應(yīng)強(qiáng)度,現(xiàn)象及說明,,,,４＋　 ３＋ ２＋ ＋ ± － Ｈ Ｈ Ｍ

14、 完全 不完全 混合凝集,抗人球蛋白試驗(yàn)(Coombs試驗(yàn)),直接抗人球蛋白試驗(yàn)(DAT) 檢測紅細(xì)胞是否在體內(nèi)被抗體或補(bǔ)體致敏,用于檢測自身免疫溶血性貧血、藥物引起的溶血、新生兒溶血病、溶血性輸血反應(yīng)間接抗人球蛋白試驗(yàn)(IAT) 在體外抗體致敏紅細(xì)胞,用于抗體篩選和鑒定、交叉配血、血型鑒定,酶試驗(yàn),原理：蛋白水解酶可將紅細(xì)胞表面的多肽鏈打斷，使多肽鏈帶

15、負(fù)電荷的唾液酸也一起離開紅細(xì)胞表面，減少了紅細(xì)胞之間的排斥力，縮短了紅細(xì)胞之間的距離，容易產(chǎn)生凝集反應(yīng)程序：2滴血清、1滴2-5%紅細(xì)胞，加入2滴酶，37℃孵育15分鐘，離心看結(jié)果。 注：酶會破壞一些抗原結(jié)構(gòu)，如M、N、Fya、Fyb 等,影響輸血效果的免疫血清學(xué)問題,速發(fā)型輸血后溶血反應(yīng)血管內(nèi)溶血主要原因: ABO血型不和遲發(fā)型輸血后溶血反應(yīng) 血管外溶血主要原因: 針對紅細(xì)胞抗原的同種抗體

16、血型抗原的同種免疫紅細(xì)胞抗原免疫強(qiáng)弱依次為Rh（D>E >C >c >e ）、 Kell、Duffy、Kidd,＞,傳統(tǒng)方法的局限性,不利于標(biāo)準(zhǔn)化管理重復(fù)性較差要求操作者的經(jīng)驗(yàn)豐富難以實(shí)現(xiàn)自動化操作,凝膠凝集試驗(yàn),凝膠凝集試驗(yàn) - 原理 (1),通過離心使紅細(xì)胞被擠過裝有過濾介質(zhì)的小柱凝集的紅細(xì)胞被阻擋在小柱中過濾介質(zhì)的頂部或中央， 而未凝集的紅細(xì)胞則到達(dá)小柱的底部血型或AHG試劑被加入到過濾

17、介質(zhì)由于紅細(xì)胞和血清成分以不同的速度通過小柱（重力加速度不同），從而消除了血清中未結(jié)合的球蛋白中和AHG的可能性，因而，在抗人球試驗(yàn)中，不用清洗紅細(xì)胞,凝膠凝集試驗(yàn),凝膠抗人球試驗(yàn),新技術(shù)——卡式檢測法： 1986年法國Dr.Yves Lappierre發(fā)明了用于分離凝集紅細(xì)胞的凝膠卡式檢測法。經(jīng)過不斷改進(jìn)和臨床的大量應(yīng)用，目前在發(fā)達(dá)國家已作為臨床常規(guī)的紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測新技術(shù)。 1994年凝膠卡式檢測法用于臨床常規(guī)

18、的紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測，已得到美國FDA權(quán)威機(jī)構(gòu)的認(rèn)證。,凝膠酶試驗(yàn),酶法： 利用木瓜酶或菠蘿酶來破壞紅細(xì)胞表面的唾液酸，使細(xì)胞膜表面失去電荷，減少紅細(xì)胞間的排斥；同時暴露某些隱蔽抗原，增強(qiáng)凝集反應(yīng)。主要用于一些不完全抗體的檢測。,凝膠凝集試驗(yàn) - 原理(2),標(biāo)準(zhǔn)化的孵育時間標(biāo)準(zhǔn)化的離心時間標(biāo)準(zhǔn)化的判讀 - 消除主觀因素對弱反應(yīng)結(jié)果的判讀結(jié)果穩(wěn)定保存,凝膠試驗(yàn)應(yīng)用于血型血清學(xué),血型實(shí)驗(yàn)室中的一次革命在全世界許多

19、發(fā)達(dá)國家已被公認(rèn)為是常規(guī)免疫血液學(xué)實(shí)驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。,1990年，卡式檢測法的發(fā)明人Dr. Yves Lapierre等用低離子強(qiáng)度鹽水法（試管法）、聚凝胺試驗(yàn)（試管法）和卡式檢測法（凝膠）研究了400例已知抗體的樣本。血清與細(xì)胞的比例是按照試管法標(biāo)準(zhǔn)配置。結(jié)果為：卡式檢測法檢出359例（檢出率為90%）低離子強(qiáng)度鹽水法檢出243例（檢出率為61%）聚凝胺試驗(yàn)檢出301例（檢出率為75%）,凝膠試驗(yàn)應(yīng)用于血型血清學(xué),結(jié)果判斷

20、模式,凝膠試驗(yàn)應(yīng)用于血型血清學(xué),《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》,明確規(guī)定部分病人應(yīng)做“抗體篩選”檢測，第四章第17條：“凡遇以下情況必須按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》有關(guān)規(guī)定做抗體篩選試驗(yàn)：1、交叉配血不合的； 2、對有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需接受多次輸血者。,為什么要開展輸血前的“抗體篩選”檢查,1、目前已知紅細(xì)胞有26個抗原系統(tǒng)（確認(rèn)21個，如ABO、Rh、MN、LW、MNS、JK等），500多種抗原（確認(rèn)200多種）。紅細(xì)胞抗原的多樣性決定了抗

21、體的多樣性，檢測抗A、抗B、抗D（ABO血型、Rh血型）可確保絕大多數(shù)病人的輸血安全，但仍不能避免因血型不合（ABO、Rh血型以外）而引發(fā)的溶血。,,2、臨床有的病人出現(xiàn)慢性（遲緩性）溶血反應(yīng)，易忽視或引不起臨床醫(yī)師重視。 （理論上講，成年人每輸1U的濃縮紅細(xì)胞，在不丟失、不被破壞（溶血）的前提下，應(yīng)能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl),保持15-30天。如果輸3-4U RBC，病人Hb上升不到10g/L，或幾天后（1周

22、內(nèi)）Hb仍舊下降到原來水平，甚至更低。這種情況，就要考慮是否有慢性溶血反應(yīng)存在。）3、有利于早期發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)具有臨床意義的抗體，獲得充足的時間來選擇相配合的血，避免由于尋找不到相合的血液而造成患者病情的延誤。,抗體篩選檢查,一、什么叫“抗體篩選”檢查 1、不規(guī)則抗體的含義：通常把抗A、抗B以外的所有紅細(xì)胞血型抗體稱為不規(guī)則抗體。如抗D、抗N、抗M、jk-抗體。 2、“抗體篩選”的含義：用具備有臨床意義的血型抗原的O型紅細(xì)

23、胞，檢測病人血清（含多種抗體）；如果出現(xiàn)聚集現(xiàn)象，則提示病人有不規(guī)則抗體存在，可判為“抗體篩選”陽性。,抗體篩選技術(shù)要求,盡可能多的檢測出有臨床意義的抗體。 盡可能少的檢測出無臨床意義的抗體。 盡可能快的完成抗體檢測,方法選擇：每種方法都有自己的特點(diǎn)，適應(yīng)于不同范圍及情況,鹽水法：可以用于檢測干擾ABO定型的鹽水反應(yīng)活性抗體，如：MN、P血型抗體。但此方法會檢查出無臨床意義的抗體，如冷凝集素抗－I及抗－IH等，而且會漏檢IgG性質(zhì)的

24、抗體。低離子聚凝胺法（LIP-IAT）：所需試驗(yàn)時間少（3～5分鐘）、方法靈敏度高，準(zhǔn)確性高，但無法排除無臨床意義抗體的干擾。 間接抗人球方法：是很靈敏且有效的檢測抗體的方法，同時此方法可以有效的避免無臨床意義抗體的干擾。缺點(diǎn)：耗時間長，步驟多。,抗體特異性鑒定,使用譜細(xì)胞確定抗體的特異性，譜細(xì)胞一般由8-16種含有不同抗原的O型紅細(xì)胞配套組成，根據(jù)譜細(xì)胞的反應(yīng)格局一般可以鑒定常見的抗體。,檢測新生兒溶血的“三項(xiàng)試驗(yàn)”,①直抗試驗(yàn)：

25、即用直接抗球蛋白試驗(yàn)的方法，檢測新生兒紅細(xì)胞上是否存在免疫抗體。 ②游離試驗(yàn)：是檢測新生兒血清中的血型抗體。 ③釋放試驗(yàn)：和直抗試驗(yàn)相同，也是檢測新生兒紅細(xì)胞上的致敏的血型抗體，只是方法不同。,交叉配血試驗(yàn)的涵義,目的：是檢查供、受血者血液中是否含有不相合的抗原 和抗體成分的試驗(yàn)。 ① 發(fā)現(xiàn)ABO血型鑒定的錯誤：如將O型受血者誤定為A型，當(dāng)與A型獻(xiàn)血者交叉配血時，病人血清與獻(xiàn)血者紅細(xì)胞即可出現(xiàn)凝集，從而避免嚴(yán)重

26、的溶血性輸血反應(yīng)。 ② 發(fā)現(xiàn)不規(guī)則凝集素：如含抗A1不規(guī)則凝集素的A2型血清，與A1型獻(xiàn)血者紅細(xì)胞配血時，可出現(xiàn)凝集，這種不規(guī)則凝集素一般為冷凝集素，如效價不高，影響不大。但若為免疫性抗體，37℃條件下效價較高，就必須選用亞型相同的血液，否則可產(chǎn)生溶血性輸血應(yīng)。 ③ 發(fā)現(xiàn)ABO血型以外的其他抗體：如抗P1，抗H等天然抗體和抗D等免疫性抗體，雖然輸入的血液ABO血型相同，但ABO血型以外的其他抗體存在時，同樣可能引起嚴(yán)重的溶血性輸

27、血反應(yīng)。特別是現(xiàn)在許多化驗(yàn)室因?yàn)闂l件的限制不可能對ABO及RH（D）以外的血型全部進(jìn)行鑒定，全靠交叉配血發(fā)現(xiàn)血型的不同和ABO、RH（D）血型以外的其他抗體的存在。,程序,查詢受血者既往血型檢查紀(jì)錄；對受血者血樣作ABO、RH血型鑒定及血型抗體篩選、抗體鑒定；選擇預(yù)先進(jìn)行血型檢查的合格供血者作交叉配血試驗(yàn)；A.主側(cè)配血：受血者血清 + 供血者紅細(xì)胞——檢測對供者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體；B.次側(cè)配血：受血者紅細(xì)胞 + 供血者血清——檢

28、測對受者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體；C.自身對照：受血者紅細(xì)胞 + 受血者血清——顯示自身抗體、直接Coomb,s陽性紅細(xì)胞緡錢狀凝集（假陽性）以及在低溫下的冷凝集。,結(jié)果,交叉配血試驗(yàn)的任何步驟中均不產(chǎn)生溶血和凝集的結(jié)果，供者的血液成分才可發(fā)給患者輸注。紅細(xì)胞抗原與相對應(yīng)的免疫抗體相遇，在有補(bǔ)體存在就可發(fā)生溶血。溶血反應(yīng)與凝集反應(yīng)在交叉配血上意義相同，都是抗原抗體反應(yīng)。 溶血的標(biāo)本不應(yīng)用作配血。,交叉配血中責(zé)任性錯誤：,1. 無論是對

29、病人還是工作都要有高度的工作責(zé)任感，并嚴(yán)格按照規(guī)程操作。2. 各種器材要干凈，干燥（或用等滲鹽水洗滌），防止溶血。3. 配血、發(fā)血和登記時要仔細(xì)核對病人的姓名、病房、床號、住院號、血型。不要加錯血清、紅細(xì)胞和試劑，防止由于滴管、吸管、試管的紊亂，而造成被檢者之間、血清和紅細(xì)胞之間的相互污染。4. 病人和獻(xiàn)血者的血標(biāo)本必須符合標(biāo)準(zhǔn)，不要長期放在室溫下，以免污染和滋生細(xì)菌。等滲鹽水必須等滲、新鮮、無微生物滋生。5 觀察結(jié)果要仔細(xì)，

30、微弱凝集或肉眼觀察未凝集的標(biāo)本，要用顯微鏡觀察。注意特異性凝集與繼發(fā)性血液凝固、緡錢狀凝集形成的區(qū)別。,,6. 觀察結(jié)果，要遵守規(guī)定時間，冬季要注意保溫，避免冷凝集素干擾結(jié)果。7. 注意病人的輸血史，有無不良反應(yīng)，女病人要注意妊娠及分娩史。對反復(fù)輸血的病人，每取一次配血標(biāo)本，不要連用三天以上，更不能供反復(fù)多次配血用。因?yàn)槿魏我淮屋斞加挟a(chǎn)生抗體的可能，因此前次輸血使用過的配血標(biāo)本不能代表病人再次輸血時體內(nèi)的情況，所以，超過三天，應(yīng)另取

31、病人標(biāo)本配血。8. 登記結(jié)果和填發(fā)報(bào)告要仔細(xì)正規(guī)，查對無誤后，才能發(fā)出報(bào)告。特別要注意不要在配血結(jié)果尚未出來時就已填好報(bào)告，防止很忙時將配血試管遺忘在離心機(jī)內(nèi)。9. 配血后應(yīng)將配血標(biāo)本置冰箱保存，保留至血液輸完至少七天后，以備復(fù)查。,假陽性及其控制對策：,1. 紅細(xì)胞緡錢狀凝集：紅細(xì)胞相互重疊，連接成串，象一串重疊的錢幣，又稱串錢狀凝集。可由以下原因引起。患者纖維蛋白原升高或異常蛋白血癥（多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥），新生兒臍帶

32、血中含有華頓膠，實(shí)驗(yàn)室中溫度過高、作用時間太長致水分蒸發(fā)、血清濃縮。紅細(xì)胞緡錢狀凝集不是抗原抗體反應(yīng)，不是配血禁忌，如獻(xiàn)血者正常，明確是假凝集后，可以輸血。 控制對策：①多加生理鹽水可稀釋血液使緡錢狀紅細(xì)胞散開②用高倍顯微鏡仔細(xì)觀察紅細(xì)胞凝集塊的形態(tài)（紅細(xì)胞未被破壞）③察看病人診斷④用洗滌后的紅細(xì)胞配血。,,2. 冷凝集：在較低溫度下出現(xiàn)凝集而溫度＞25℃時凝集即可消失的凝集稱為冷凝集。多數(shù)正常人的血清在0℃～4℃時能凝集本

33、人的紅細(xì)胞，所以又稱自身凝集，這種冷凝集素的效價一般不超過1：16，這種凝集是可逆的。但一些自身免疫性疾病、非典型性肺炎、病毒性肝炎、肝硬化、多發(fā)性骨髓瘤、惡性淋巴瘤等疾病患者的血清中，可以出現(xiàn)高效價的冷凝集素且能與本人及其它各型人的紅細(xì)胞發(fā)生凝集。注意配血報(bào)告要注明有冷凝集現(xiàn)象。 控制對策：①標(biāo)本在血清沒有完全析出之前不要放入冰箱②可將配血結(jié)果置37℃水浴箱溫浴之后看，并反復(fù)觀幾次③將紅細(xì)胞用37℃生理鹽水洗滌或用2—Me處理血

34、清以消除冷凝集素之后進(jìn)行配血④可用自身或兔紅細(xì)胞反復(fù)吸收放散的方法除去血清中的冷凝集素。,,3. 自身免疫性溫型抗體： 自身免疫性溶血性貧血的病人血清中可有溫型自身抗體。其特點(diǎn)是反應(yīng)溫度在37℃比室溫作用強(qiáng)或相同，能凝集自身和其他各型紅細(xì)胞，病人紅細(xì)上吸附了這種抗體，在自身或他人血清中，均可出現(xiàn)凝集。 控制對策：可用遞增溫度（由22℃37℃ 45℃）生理鹽水洗滌紅細(xì)胞后再進(jìn)行配血。如果最后仍有凝集，可選用凝集較弱的血與患

35、者輸注。緩慢輸注，密切觀察，一旦病人出現(xiàn)反應(yīng)應(yīng)立即停止輸注。此類病人萬不得已不要輸血,可用其他辦法替代.,,,,4. 全凝集與多凝集： 全凝集：人的紅細(xì)胞都含有H抗原，如果標(biāo)本被棒狀桿菌污染，血清中可出現(xiàn)H抗體，這種抗體與含有H抗原的各型紅細(xì)胞發(fā)生凝集，這種血清稱為全凝集血清。取多個已知O型血人的紅細(xì)胞與此懷疑的血清作試驗(yàn)，如都能凝集，即可證明為全凝集血清。 多凝集：人的紅細(xì)胞上含有一種無活性的T隱性受體

36、，在實(shí)驗(yàn)室中某些細(xì)菌或細(xì)菌產(chǎn)生的酶污染紅細(xì)胞后可以使T受體致活，而正常人血清中多數(shù)都含有抗T抗體，因此這種被活化了的T受體的紅細(xì)胞能被各型人的紅細(xì)胞凝集（新生兒的血清除外）。這種現(xiàn)象稱又稱為T凝集現(xiàn)象。T凝集現(xiàn)象也可偶見于某些有明顯細(xì)菌感染的病人且多為O型病人，其次為A和B型，AB型病人出現(xiàn)T凝集現(xiàn)象的則未見報(bào)道。病人的T凝集現(xiàn)象具有以下特點(diǎn)：①病人的紅細(xì)胞不被本人的紅細(xì)胞凝集，冷凝集的病人血清能凝集自己的紅細(xì)胞；②T凝集在室溫較強(qiáng)，3

37、7℃較弱或消失，冷凝集在37℃消失，在4℃最強(qiáng)；③病人有感染史，多凝集的表現(xiàn)未暫時性的，一般在病愈后即自行消失；④血庫儲存的血液制品出現(xiàn)全凝時，細(xì)菌培養(yǎng)可為陽性；⑤多凝集的凝塊較大，但游離紅細(xì)胞較多。 控制對策：①試管、滴管等應(yīng)經(jīng)常保持清潔，不被細(xì)菌污染②如懷疑為全凝集或多凝集，首先用多份AB型血清加以證明。②注意標(biāo)本的保存，新鮮不被污染。,5. 類B抗原形成(即獲得性B抗原)：,某些A型老年癌癥患者和腸道革蘭氏陰性桿菌（如大腸

38、桿菌O86、普通變形桿菌等）感染的病人，其紅細(xì)胞除能被抗A血清凝集外，也能與抗B血清發(fā)生凝集。血清中仍含有正常的抗B，好像紅細(xì)胞獲得了一種與B類似的抗原稱為類B抗原。此類病人可能導(dǎo)致血型鑒定錯誤,所以必須要有正反定型才能判定血型.交叉配血、輸血時一定要謹(jǐn)慎。有人認(rèn)為有些細(xì)菌的酶含有乙?；改苁固禺愋訟物質(zhì)末端的N—乙酰氨基半乳糖水解成半乳糖。類B抗原有以下特點(diǎn)：①類B與抗B的反應(yīng)與正常B抗原與抗B的反應(yīng)弱，一般無溶血現(xiàn)象。類B是獲得性的

39、，不符合遺傳規(guī)律，病情好轉(zhuǎn)，類B就消失。②類B與抗B結(jié)合疏松，用紅細(xì)作吸收放散試驗(yàn)，可放散出大量抗B。類B病人的唾液不含該血型物質(zhì)。③在AB血的交叉配血時，如發(fā)現(xiàn)主側(cè)凝集，應(yīng)考慮類B存在，應(yīng)重新定血型并檢查唾液中的血型物質(zhì)。④類B與多凝集不同，前者只與抗B反應(yīng)，在AB型血清中不凝集，后者與AB型血清中凝集。,,6. 抗儲存紅細(xì)胞抗體： 紅細(xì)胞在37℃儲存2天，在室溫室溫儲存4~7天，在4℃冰箱儲存2~3個月以后，能與少數(shù)人的血清發(fā)

40、生非特異性凝集。這種血清中抗體叫做抗儲存紅細(xì)胞抗體，能與酶處理紅細(xì)胞發(fā)生非特異凝集或溶血，造成交叉配血的紊亂。此抗體對輸血無影響。,,7. 自發(fā)性或繼發(fā)性凝固： 這種凝固不是抗原抗體的反應(yīng)，而是因?yàn)椴裳獎幼骶徛?，血液自行凝固，或是用血漿配血時，當(dāng)用具或生理鹽水中Ca離子較多，即可發(fā)生繼發(fā)性凝固。這種凝固往往看到白色的纖維蛋白網(wǎng)。 控制對策：防止Ca離子污染，注意判斷結(jié)果時繼發(fā)性凝固與紅細(xì)胞凝集的區(qū)別。,假陰性及其控制對策,1. 紅細(xì)

41、胞過濃或過淡： 抗原抗體比例適當(dāng)，反應(yīng)最明顯。如果紅細(xì)胞懸液（最適為3%~5%）過濃，血清中的抗體全被吸收呈后帶現(xiàn)象，以致凝集不明顯，不凝集；如果紅細(xì)胞懸液過淡，血清中的抗體濃度相對太高呈前帶現(xiàn)象，以致凝集不明顯，不凝集。 控制對策：按規(guī)定配制紅細(xì)胞懸液，微弱凝集用顯微鏡看結(jié)果。,,2. 溶血性抗原或血型物質(zhì)的中和作用 未經(jīng)洗滌的紅細(xì)胞懸液中，帶有血漿中的血型物質(zhì)。特別是輕度溶血時，部分紅細(xì)胞溶解，釋放出大量溶解性抗原，可

42、將血清中對應(yīng)抗體中和，導(dǎo)致抗體不足，使紅細(xì)胞不凝集。 控制對策：不使用溶血標(biāo)本，紅細(xì)胞洗滌后使用。,,3.血型抗體水平下降： 老年人血型抗體水平下降某些免疫缺陷的病人或慢性淋巴細(xì)胞白血病、遺傳性無丙種球蛋白血癥以及某些使用免疫抑制劑的患者，由于免疫球蛋白下降，抗體水平下降甚至缺如?？沙霈F(xiàn)交叉配血假陰性。 控制對策：注意病人的年齡、診斷，用顯微鏡觀察結(jié)果。,,4. 抗原減弱： 由于白血病或某些惡性腫瘤使A或B抗原變

43、弱，易判為不凝集。嬰兒及老人的紅細(xì)胞抗原也較青年人弱。在實(shí)驗(yàn)室保存過久的標(biāo)本中紅細(xì)胞抗原性也會減弱。 控制對策：用顯微鏡觀察結(jié)果，注意病人年紀(jì)，盡量不用儲存過久的標(biāo)本。,,5. 試驗(yàn)溫度不適當(dāng)： 完全抗體作用的最適溫度多在4℃~20℃左右，如達(dá)37℃則凝集力下降；不完全抗體作用的最適溫度多在37℃左右。 控制對策：嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度。,,6. 不完全抗體遮斷： 新生兒溶血病的病兒紅細(xì)胞的血型抗原被母親體內(nèi)的不完全抗

44、體致敏，從而遮斷其與相特異性的完全抗體的反應(yīng)（如IgG抗A遮斷A抗原與IgM抗A的反應(yīng)）。 控制對策：將患兒標(biāo)本作放散試驗(yàn)后再進(jìn)行配血試驗(yàn)。,,7. 試管占染了洗滌劑會造成假陰性。,交叉配血試驗(yàn)有關(guān)結(jié)果及其解釋,一、試驗(yàn)結(jié)果 ：主側(cè)：+ 次側(cè)：－ 自身對照－抗體篩選：－ 可能的解釋 ：①病人或供血者ABO血型定錯 ②病人血清中可能含有一種ABO抗體 ③病人血清的同種抗體與供血者紅細(xì)胞的抗原發(fā)生反應(yīng)，但在篩選紅細(xì)胞上無此

45、抗原。 ④供血者若為DAT陽性討 論 ：①重新鑒定病人和供血者ABO血型②鑒定病人亞血型③對病人血清進(jìn)行抗體鑒定 ④供血者可能為DAT陽性，應(yīng)重新選擇與病人相配的血液,,二、試驗(yàn)結(jié)果 ：主側(cè)：+ 次側(cè)：－ 自身對照－抗體篩選：＋可能的解釋 ：病人血清中的同種抗體與供血者紅 細(xì)胞及篩選細(xì)胞上的抗原反應(yīng)討論 ：對病人進(jìn)行抗體鑒定，重新配血,,三、試驗(yàn)結(jié)果：主側(cè)：+ 次側(cè)：－自身對照：＋抗體篩選：＋可能的解釋 ：①病人血清中