洛陽地區(qū)供血者RhCE血型遺傳學(xué)和基因多態(tài)性研究.pdf

1、背景：Rh血型作為最復(fù)雜和最具有免疫原性的紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，含有國際輸血協(xié)會確證的RH1～RH50共50個抗原，與臨床輸血反應(yīng)和新生兒溶血病(HDN)特異性相關(guān)的五個抗原分別為D、C、E、c和e。同RhD抗原一樣，RhC/c和RhE/e可以刺激機(jī)體引起免疫應(yīng)答，RhD抗原免疫引起疾病的成功預(yù)防引起大家對RhCE抗原的關(guān)注。目前大多數(shù)RH基因的研究結(jié)論是以歐洲白人為研究對象的，因RH基因在不同種族和人群中存在多態(tài)性，自種人的結(jié)果對其它種族和

2、人群來說，是不可靠的。RH血型等位基因具有多態(tài)性，目前已檢測到弱的或者部分的RHD等位基因超過170種，可以預(yù)期RHCE基因具有相似的多態(tài)性，如同弱D和RhD之間的抗原免疫，變異的RhCE抗原也會發(fā)生免疫應(yīng)答。但是在目前的研究中，還未見對中國獻(xiàn)血員免疫原性變異的C，c，E，e抗原開展分子基礎(chǔ)的系統(tǒng)性深入分析研究。
　　 目的：本研究期望通過觀察隨機(jī)選擇的獻(xiàn)血員人群Rh表型頻率，從表型推測RHCE基因頻率，從而估測出Rh單倍型頻率

3、。對Rh基因分型與血清學(xué)表型結(jié)果不一致情況，通過分子生物學(xué)技術(shù)檢測主要的RHCE變異等位基因，研究變異RhCE抗原的分子特征，分析RHCE基因的遺傳學(xué)特征和基因多態(tài)性，為Rh抗原在臨床輸血醫(yī)學(xué)、遺傳學(xué)和免疫學(xué)等方面的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法：統(tǒng)計(jì)2005年1月至2011年12月356071例捐獻(xiàn)全血的獻(xiàn)血員中的RHD陰性數(shù)據(jù)，在2010年到2011年期間采用兩套單克隆抗-C、-c、-E和抗-e試劑，在全自動血型儀上隨機(jī)選擇

4、10373例RHD陽性獻(xiàn)血員進(jìn)一步檢測RhCE血清學(xué)表型。利用哈德-伯格遺傳平衡定律比較預(yù)期值和觀察值之間的差異進(jìn)行基因遺傳吻合度檢測，用方根法計(jì)算Rh基因頻率和單倍型頻率，卡方檢驗(yàn)檢測不同型別之間的差異性。RHCE基因分型采用以聚合酶鏈反應(yīng)--等位基因特異性引物(PCR-SSP)試驗(yàn)技術(shù)。血清學(xué)弱反應(yīng)(可以確定抗原陽性的弱反應(yīng)和極弱反應(yīng))的C、c、E或e抗原樣本和基因分型與血清學(xué)分型不一致樣本檢測RHCE變異等位基因，采用多重PCR-

5、SSP技術(shù)檢測基因銀行公布的23個RHCE等位基因，一些特異的RHCE等位基因鑒定需要進(jìn)行DNA序列分析。
　　 結(jié)果：研究得到Rh血型基因和單倍型頻率為D：0.9329、d：0.0671、DCe：0.6153、DcE：0.2704，Dce：0.0341、DCE：0.0132、dCe：0.0123、deE：0.0006、dcE：0.0024、dce：0.0518。Rh血型單倍型頻率分布和均衡性與中國漢族人在基因平衡條件下沒有顯著

6、性差異(P>0.05)，RHCE基因和單倍型頻率在不同RhD表達(dá)類型中的分布有顯著性差異(P<0.05)，觀察到D抗原弱表達(dá)或不表達(dá)與Ccee表型正相關(guān)，與CCee、CcEe表型呈負(fù)相關(guān)。自動化血清學(xué)檢測檢測229例樣本攜帶弱的C、c、E或e抗原，54例樣本基因分型與血清學(xué)分型不一致。在283例樣本共檢測出22種具有明確單核苷酸突變的等位基因，多態(tài)性基因RHces(R114W)、RHcE(EI，Ew；M167K)，RHCE(M267K)

7、、RHCe(L297P)、RHce(VS：L245V)、RHces(G331C)和RHcE(L303Q)等檢出頻率最高，最可能的變異單倍型為Dce，dce，DCe，DcE。這些RHCE等位基因變異體與C、c、E和e抗原的血清學(xué)免疫原性減弱相關(guān)，且大多數(shù)變異的RHCE等位基因和正常的RHCE等位基因以雜合體形式存在。
　　 結(jié)論：(1)洛陽地區(qū)Rh各表型分布符合Hardy-Wehlberg基因遺傳平衡定律；(2)RHCE基因和單倍