豬Pit-1基因分子遺傳多態(tài)性研究.pdf

1、催乳素(Prolactin,PRL)、生長激素(Growth Hormone,GH)、促甲狀腺素(Thyroid-stimulating Hormone,TSH)是動物垂體前葉分泌的具有重要生理功能的激素.而垂體特異性轉(zhuǎn)錄因子(Pituitary-Specific Transcription Factor)Pit-1則是動物垂體前葉特異表達的一種具有重要功能的轉(zhuǎn)錄因子,它與垂體中PRL基因、GH基因、TSH基因以及Pit-1自身的啟動子

2、結(jié)合,調(diào)控這些基因的轉(zhuǎn)錄和表達,從而影響動物的生長、發(fā)育和繁殖.該研究的目的是通過分子生物技術(shù)手段,尋找豬Pit-1基因序列中的多態(tài)位點,為后續(xù)深入研究提供理論依據(jù).試驗選用北京黑豬、沂蒙黑豬、萊蕪豬、巴馬小型豬、滇南小耳豬、五指山豬、香豬7個中國地方豬品種以及英系大白豬、長白豬、法系大白豬、杜洛克4個國外引入品種(系)共11個試驗動物群體508頭個體.采用PCR-SSCP和PCR-RFLP分析方法研究豬Pit-1基因的遺傳變異,研究結(jié)

3、果如下:1.應(yīng)用PCR-SSCP技術(shù),利用引物P<,1>,在7個中國地方豬種Pit-1基因第4外顯子上發(fā)現(xiàn)了一個突變位點.序列測定結(jié)果表明,其單核苷酸變異是由堿基C→T的替換造成的,但并沒有導(dǎo)致編碼氨基酸的改變,均編碼組氨酸.對7個中國地方豬群體共計347頭個體的基因型進行了檢測與統(tǒng)計分析,Hardy-Weinberg平衡適合性檢驗結(jié)果表明:在這7個群體中,沂蒙黑豬、巴馬小型豬群體的基因頻率和基因型頻率都處于平衡狀態(tài)(P>0.05),而

4、北京黑豬、萊蕪豬、滇南小耳豬、五指山豬、香豬群體則未達到平衡狀態(tài)(P<0.05);另由多態(tài)信息含量(PIC)值的計算可知此基因座位在萊蕪豬和五指山豬群體中多態(tài)性不高,遺傳變異不大,而在北京黑豬、沂蒙黑豬、巴馬小型豬、滇南小耳豬和香豬群體中則呈現(xiàn)中度多態(tài).2.應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù),利用引物P<,3>,在4個國外引入豬種(系)Pit-1基因的包含部分內(nèi)含子4、全部外顯子5、內(nèi)含子5、外顯子6及部分3'側(cè)翼的1747bp的擴增片段中檢測到

5、多個突變位點,并驗證了一個RsaI-RFLP多態(tài)位點,在此位點上產(chǎn)生了A、B兩個等位基因.測序分析表明:其多態(tài)性的產(chǎn)生是由于第542位堿基G→C的替代造成的.該切點存在時產(chǎn)生的片段為等位基因A,消失時產(chǎn)生的片段為等位基因B.在英系大白豬、長白豬、法系大白豬、杜洛克4個國外引入品種(系)群體共計161頭個體中分析了此突變位點的基因型情況,Hardy-Weinberg平衡適合性檢驗結(jié)果表明:英系大白豬和杜洛克豬群體處于平衡狀態(tài)(P>0.05

6、),而長白豬和法系大白豬群體未處于平衡狀態(tài)(P<0.05);另由多態(tài)信息含量(PIC)值的計算可見,4個國外引入品種(系)豬群體均處于中度多態(tài),說明此基因座位在這4個國外引入品種(系)豬群體中多態(tài)性高,遺傳變異大.同時,經(jīng)過預(yù)測,發(fā)現(xiàn)其中的一個SNP可能使豬內(nèi)含子5中出現(xiàn)了新的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點.3.利用引物P<,4>成功地克隆山豬Pit-1基因的部分外顯子3及全部內(nèi)含子3的序列.從而為豬Pit-1基因的進一步研究奠定了基礎(chǔ).該試驗在Pi