豬MLH1、KLK7基因的分子鑒定、多態(tài)性及產(chǎn)仔數(shù)關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、云南地方豬種豐富且獨(dú)特，是構(gòu)成云南養(yǎng)豬業(yè)重要的種質(zhì)基礎(chǔ)，云南地方豬種產(chǎn)仔數(shù)普遍較低，嚴(yán)重制約了云南養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究表明，決定豬產(chǎn)仔數(shù)的高低的分子機(jī)制異常復(fù)雜，涉及到眾多基因包括非編碼RNA的表達(dá)與調(diào)控。目前關(guān)于云南地方豬種產(chǎn)仔數(shù)高低的分子遺傳學(xué)機(jī)制方面的研究取得了一定的進(jìn)展，主要從候選基因水平即DNA的水平探討云南地方豬種產(chǎn)仔數(shù)高低的遺傳機(jī)理，本研究以低產(chǎn)仔數(shù)的6個(gè)云南地方豬種為研究對(duì)象，以較高高產(chǎn)仔數(shù)的大白豬和長(zhǎng)白豬為參照

2、，研究與繁殖相關(guān)的兩個(gè)基因（MutL同源體1，直腸癌,非息肉病性型2（MLH1）基因和激肽釋放酶7（KLK7）基因），以探討這兩個(gè)基因是否可以作為與豬產(chǎn)仔數(shù)相關(guān)的候選基因進(jìn)行后續(xù)研究，具體為：
　　1、MutL同源體1，直腸癌，非息肉病性型2（MLH1）是與繁殖相關(guān)的重要基因。在本研究中，豬MLH1基因的全長(zhǎng)cDNA通過(guò)RACE技術(shù)被克隆。該基因編碼蛋白質(zhì)具有757個(gè)氨基酸殘基，和藏羚羊、羊、牛、南方白犀牛、山羊分別具有：96％、

3、95%、93%、92%、92%的高度同源性。這個(gè)基因歸屬于GeneID：100337665?；蜻M(jìn)化分析表明豬MLH1基因和南方白犀牛的MLH1基因具有較近的遺傳關(guān)系。通過(guò)PCR-Hha I-RFLP分析發(fā)現(xiàn)在該基因mRNA395-bp處具有一個(gè)G/A突變(GU373696：c395 G>A)，8個(gè)豬種在該突變位點(diǎn)等位基因頻率和基因型頻率具有很大的差異。該突變多態(tài)性和大白豬（n=200）、長(zhǎng)白豬（n=200）的產(chǎn)子數(shù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析表明該突

4、變與總產(chǎn)子數(shù)關(guān)聯(lián)極顯著（P＜0.01）。因此，豬MLH1基因可以作為豬產(chǎn)子數(shù)候選基因以來(lái)提高豬產(chǎn)子數(shù)。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果為豬MLH1基因的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。
　　2、激肽釋放酶7（Kallikrein-related peptidase7，KLK7）是另外一個(gè)與繁殖相關(guān)的重要基因。在本研究中，通過(guò)RT-PCR技術(shù)，克隆豬KLK7基因的全長(zhǎng)編碼序列。該基因的序列分析表明，豬KLK7基因編碼含有257個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)與6種生

5、物KLK7蛋白具有高度同源性：北極熊（95%）、威德?tīng)柡１?4%）、狗（92%）、太平洋海象（95%）、家貓（92%）、東北虎（91%）具有高度同源性。通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助分析表明該基因結(jié)構(gòu)有5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子。基因進(jìn)化分析表明，豬KLK7基因和狗的KLK7基因具有較近的親源關(guān)系。通過(guò)PCR-Alu I-RFLP分析發(fā)現(xiàn)在該基因mRNA390-bp處具有一個(gè)T/C突變（GU373714：c390 T>C），8個(gè)豬種在該突變位點(diǎn)等位基因頻