溶液各種配制

1、附錄：常用試劑配制及應(yīng)用附錄：常用試劑配制及應(yīng)用一、常用緩沖液、試劑的配制一、常用緩沖液、試劑的配制碳酸鹽緩沖液碳酸鹽緩沖液(CarbonateBicarbonate(CarbonateBicarbonateBuffer)Buffer)由于碳酸鹽pH值偏堿，因此，常用于pH9的緩沖液配制（附表1）。附表1.0.2molL碳酸鹽緩沖液（pH9.2～10.7）pHpH0.2molL0.2molLNaNa2COCO3(ml)(ml)0.2mo

2、lL0.2molLNaHCONaHCO3(ml)(ml)pHpH0.2molL0.2molLNaNa2COCO3(ml)(ml)0.2molL0.2molLNaHCONaHCO3(ml)(ml)9.29.24.04.046.046.010.010.027.527.522.522.59.39.37.57.542.542.510.110.130.030.020.020.09.49.49.59.540.540.510.210.233.033.

3、017.017.09.59.513.013.037.037.010.310.335.535.514.514.59.69.616.016.034.034.010.410.438.538.511.511.59.79.719.519.530.530.510.510.540.540.59.59.59.89.822.022.028.028.010.610.642.542.57.57.59.99.925.025.025.025.010.710.74

4、5.045.05.05.0磷酸緩沖液磷酸緩沖液(Phosphate(PhosphateBuffersBuffers，PB)PB)磷酸鹽是使用最廣泛的一種緩沖劑，由于它們是二級(jí)解離，有二個(gè)pKa值，所以用它們配制的緩沖液，pH范圍最寬。NaH2PO4：pKa1＝2.12，pKa2＝7.21；Na2HPO4：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32。另外，磷酸鹽還有鉀鹽分子形式，一般來(lái)說(shuō)，低溫時(shí)鈉鹽難溶，鉀鹽易溶，因此，配制細(xì)胞培養(yǎng)用試劑時(shí)

5、常常添加鉀鹽試劑，但若配制十二烷基硫酸鈉（SDS）聚丙烯酰胺凝膠電泳的緩沖液時(shí)，只能用鈉鹽而不能用鉀鹽，因?yàn)镾DS會(huì)與磷酸鉀生成難溶的十二烷基硫酸鉀。磷酸緩沖液的優(yōu)點(diǎn)為：①可配制成不同離子強(qiáng)度的緩沖液；②適用pH緩沖范圍較寬；③受溫度影響緩沖液pH值變化較??；④離子強(qiáng)度對(duì)緩沖液pH影響較小，如0.1molL緩沖液稀釋10倍其pH變化小于0.1。磷酸緩沖液的缺點(diǎn)是：①磷酸鹽易與鈣離子（Ca2）、鎂離子（Mg2）及重金屬離子結(jié)合生成不溶的沉

6、淀物；②可能干擾某些生物化學(xué)反應(yīng)過(guò)程，如對(duì)某在800ml蒸餾水中溶解，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2～7.4加水定容至1L，15psi（1.05kgcm2）高壓滅菌20min，室溫保存?zhèn)溆?。TrisTris緩沖液（緩沖液（TrisHClTrisHClBufferBufferTBTB）Tris的pH值偏于堿性，因此，通過(guò)添加HCl調(diào)節(jié)pH至所需值，TrisHCl緩沖液的離子強(qiáng)度（molL）是專(zhuān)指Tris的濃度，如某一特定pH的0.05m

7、olLTris緩沖液的配制是將50ml0.1molLTris堿溶液與附表3所示相應(yīng)體積（ml）的0.1molLHCl混合，加水至將體積100ml，即為0.05molLTris緩沖液。另外，按附表3制備的緩沖液，由于試劑來(lái)源的不同，緩沖液pH可能與所需略有差異，此時(shí)可通過(guò)稍許減少或增加HCl用量，精細(xì)調(diào)節(jié)pH至所需值。附表4.0.05molLTris緩沖液pHpH需0.10.1molLmolLHClHCl（ml)ml)pHpH需0.10.

8、1molLmolLHClHCl（ml)ml)7.17.145.745.78.18.126.226.27.27.244.744.78.28.222.922.97.37.343.443.48.38.319.119.17.47.442.042.08.48.417.217.27.57.540.340.38.58.514.714.77.67.638.538.58.68.612.412.47.77.736.636.68.78.710.310.37.

9、87.834.534.58.88.88.58.57.97.932.032.08.98.97.07.08.08.029.229.2TrisTris鹽緩沖液（鹽緩沖液（TBSTBS）：）：Tris鹽緩沖液是在Tris緩沖液基礎(chǔ)上添加NaCl以維持溶液的滲透壓，因此，TBS也適用于做細(xì)胞緩沖液，常用TBS配制如下。8gNaCl、0.2gKCl以及3gTris溶解于800ml蒸餾水中，加入0.015g酚紅并用HCl調(diào)pH至7.4用蒸餾水定容至1