流感疫苗生產(chǎn)及研究進展

1、流感疫苗生產(chǎn)及研究進展,內(nèi)容,病毒性滅活疫苗概述,定義及分類,,,純化全病毒疫苗：凍干人用狂犬病疫苗出血熱、森腦----含氫氧化鋁佐劑裂解：流感病毒裂解疫苗,滅活疫苗：稱死疫苗，是指利用加熱或甲醛等理化方法將人工大量培養(yǎng)的完整的病原微生物殺死，使其喪失感染性和毒性而保持免疫原性，并結合相應的佐劑而制成的疫苗。,長春公司的病毒性滅活疫苗,兩種滅活劑的比較,常用的裂解劑,流行性感冒（Influenza）即流感，是由甲（A）、乙（

2、B）、丙（C）三型流感病毒分別引起的急性呼吸道傳染病。常造成不同程度的流行，對人類的健康造成巨大的威脅。,流感和流感病毒,流感的流行特點,是在短期內(nèi)突然發(fā)生，迅速蔓延，造成不同程度的流行，包括世界大流行，局部暴發(fā)流行及散發(fā)。具有一定的季節(jié)性：溫、寒帶地區(qū)常在冬、春季節(jié)流行，但熱帶和亞熱帶地區(qū)任何季節(jié)都可以流行。流感病毒傳播迅速、流行廣泛、抗原易變異，人群的特異性免疫狀況不穩(wěn)定。發(fā)病率高，并伴有一定的死亡率。最高的為青少年，高危人群

3、為年邁體弱或帶有慢性疾病患者。每次流感流行后在人群中總要造成不同程度的超額死亡。流感患者和隱性感染者是流感的主要傳染源。從潛伏期末到發(fā)病的急性期（約7天）都有傳染性。,死亡率升高超過一定的正常臨界水平,流感病毒形態(tài)結構,流感病毒的超細微結構照片,流感病毒電鏡照片,流感病毒形態(tài)結構,,,,,甲型流感病毒基因組各節(jié)段的大小與功能 節(jié)段 長度（bp）編碼蛋白 主要功能R

4、NAI 2341 PB2 RNA轉(zhuǎn)錄酶；識別和結合來源于宿主細胞的帽子RNA2 2320 PB1 RNA轉(zhuǎn)錄酶主要成分；啟動轉(zhuǎn)錄和RNA合成延伸RNA3 2233 PA 具有解旋酶話性RNA4 1778 HA 結合靶細胞受體，誘導病毒與靶細胞融合誘導中

5、 和抗體，凝集紅細胞RNA5 1565 NP 與基因組RNA結合，參與形成核糖核蛋白（RNP） 顆粒RNA6 1413 NA NA

6、活性；水解細胞多糖受體，協(xié)助新生病毒顆 粒從被感染宿主細胞表面游離下來，促使子代病 毒釋放RNA7 1027 M1、M2 病毒基質(zhì)膜蛋白，有保護作 用；質(zhì)子通道作用RNA8 890

7、 NS1、NS2 非結構蛋白，抑制宿主細胞蛋白合成或參與 vRNA合成,流感病毒的理化特性 流感病毒對熱敏感，通常56℃30min被滅活，但有些毒株56℃90min被滅活。 最適PH為7.0-8.0可被紫外線滅活因其為帶囊膜的病毒，故對乙醚、氯仿、丙酮等有機溶劑敏感。,流感病毒的變異,原因：流感病毒

8、結構特點天然宿主的廣泛存在密切接觸,方式： 抗原漂移（Antigenic drift） --小變異，同一亞型 --基因點突變所致 --引起流行抗原轉(zhuǎn)換（Antigenic shift） --大變異 --基因片段交換 --引起大流行,抗原漂移（Antigenic Drift）,,,,RNA,Sialic acid,,,,,,,Antibodies

9、,Hemagglutinin,Neuraminidase,HA 和/或 NA 基因的點的變異 頻繁發(fā)生 A 型和B型發(fā)生,抗原轉(zhuǎn)換（Antigenic shift),,,,,人類和動物毒株的RNA發(fā)生交換 (HA 和/或NA基因的全球性變異),導致新的亞型出現(xiàn) 少見但后果嚴重 只在 A型出現(xiàn),,1918Spanish Influenza H1N1,1957Asian Influenza H2N2,19

10、68Hong Kong Influenza H3N2,2009Novel Influenza H1N1,,,,,,H7 1980,1985,1995,2005,,1975,,,1996,2002,,,H5,2002,1997,H9,,,1999,,流感的流行情況,抗原漂移所引起的歷史上的流感流行,PB1HANA,,PB1NA,,N Engl J Med 10.1056/nejmoa0903810,甲型H1N1流感病毒,4

11、種不同來源的基因 4 different genes:北美豬流感病毒 North America swine歐亞豬流感病毒 Asia/Europe swine人流感病毒 Human influenza禽流感病毒 (非H5) Avian (Non-H5),流感的實驗室診斷,流感已成為全球患病人數(shù)最多的一類疾病。接種流感疫苗是目前預防和控制流感最經(jīng)濟、最有效的手段，已被廣泛采用，并證明有效率達到 70％以上。,,流感疫苗,目前，使用

12、的流感疫苗是三價的，包括兩種甲型（H1N1，H3N2）和一種乙型(B)流感病毒抗原成分，應用最廣泛的有： 滅活：Inactivated influenza vaccine（IIV）：6月以上 減毒：Live attenuated influenza vaccines（IAIV）：2-49歲,當前主要應用的疫苗種類,滅活疫苗種類和生產(chǎn)工藝,全病毒疫苗 裂解疫苗 亞單位疫苗,滅活疫苗種類,3

13、-4月份10-11月份,,生產(chǎn)周期5-6個月,生產(chǎn)工藝,生產(chǎn)工藝,單價原液制備,毒種和病毒尿囊液制備,毒種MOI接種量,溫濕度培養(yǎng)時間通風,溫度時間,顏色量,選胚,,,,,接種,培養(yǎng),,收獲,純化,,裂解,質(zhì)量控制,中間產(chǎn)品質(zhì)量控制,單價病毒原液質(zhì)量控制,某些病毒能夠與人或動物的紅細胞發(fā)生凝集，這稱之為紅細胞凝集反應（HA）。這種凝集反應被加入的特異性血清所抑制，即為紅細胞凝集抑制試驗（HI）。,血凝和血凝抑制試驗,血凝和血

14、凝抑制試驗,血凝素含量檢測（單擴）,標準直線,半成品質(zhì)量控制,成品檢測指標,目前廣泛應用流感疫苗季節(jié)性四價流感疫苗細胞基質(zhì)流感疫苗噴鼻減毒活疫苗基因工程流感疫苗病毒樣顆粒、病毒載體及DNA流感疫苗通用流感疫苗,研發(fā)與展望,疫苗效果影響因素,接種疫苗是當今預防和控制流感發(fā)生和流行最有效的手段。目前，使用的流感疫苗是三價的，包括兩種甲型（H1N1，H3N2）和一種乙型(B)流感病毒抗原成分，應用最廣泛的有： 滅活：Inac

15、tivated influenza vaccine（IIV）：6月以上 減毒：Live attenuated influenza vaccines（IAIV）：2-49歲,目前廣泛應用的流感疫苗,近年獲批上市的新型流感疫苗,充實一下新型流感疫苗表,1985年后在全球流行的原單一譜系B型流感病毒B／Yamagata，逐漸演變?yōu)槎N抗原性截然不同的B／Victoria和B／Yamagata二個譜系交替或者一個譜系為主的混合流行。這二個譜

16、系B型病毒之間很少或者沒有交叉保護,甲型和乙型流感病毒血凝素基因進化樹,四價流感疫苗背景,已獲批的四價流感疫苗,在研的四價流感疫苗,研究中的流感疫苗,1、病毒樣顆粒流感疫苗2、病毒載體流感疫苗3、DNA流感疫苗,通用流感疫苗,研發(fā)趨勢,流感病毒家族中各亞型的流感病毒其M1蛋白、M2蛋白、NP蛋白和HA蛋白的保守表位部分非常穩(wěn)定。將這些蛋白與佐劑或載體聯(lián)合制備出通用流感疫苗，可以刺激機會產(chǎn)生交叉免疫保護反應。,,常用信息網(wǎng)站,,,,關