實(shí)驗(yàn)六 氨基酸的紙層析法

1、氨基酸的氨基酸的紙層紙層析法析法一目的一目的了解并掌握氨基酸紙層析的原理和方法。二、原理二、原理以濾紙為支持物的層析法，稱(chēng)為紙層析法。紙層析所用展層劑大多由水和有機(jī)溶劑組成。展層時(shí)，水為靜止相，他與濾紙纖維親和力強(qiáng)；有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，它與濾紙纖維親和力弱。有機(jī)溶劑在濾紙上又下向上移動(dòng)的，稱(chēng)為上行法；有上向下移動(dòng)的，稱(chēng)為下行法。將樣品在濾紙上確定的原點(diǎn)處展層，由于樣品中各種氨基酸在兩相中不斷進(jìn)行分配，且他們的分離系數(shù)各不相同，所以不同的氨

2、基酸隨流動(dòng)相移動(dòng)的速率也不相同，于是各種氨基酸在濾紙上就相互分離出來(lái)，形成距原點(diǎn)不等的層析點(diǎn)。在一定條件下（室溫、展層劑的組成、濾紙的質(zhì)量、PH值等不變），不同的氨基酸有固定的移動(dòng)速率（Rf值）Rf=原點(diǎn)到層析點(diǎn)中心的距離原點(diǎn)到溶劑前沿的距離。用混合氨基酸做樣品時(shí)，如果只用一種溶劑展層，由于某些氨基酸的移動(dòng)速率相同或相近，就不能將它們分開(kāi)，為此，當(dāng)用一種溶劑展層后，可將濾紙旋轉(zhuǎn)90度，以第一次所的層析點(diǎn)為原點(diǎn)，在用另一溶劑展層，從而達(dá)到

3、分離的目的。這種方法稱(chēng)為雙向?qū)游龇ā１驹囼?yàn)主要介紹的是單向?qū)游龇?。其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸組成。3、點(diǎn)樣后將濾紙放入層析缸中展層，注意點(diǎn)樣線(xiàn)要高于層析液面，濾紙不要貼在層析缸璧上，當(dāng)展層至另一端1~2cm處時(shí)，停止展層（大約2~3小時(shí)）。4、取出濾紙，用鉛筆記下溶劑前沿，然后用熱風(fēng)吹干（或烘箱60℃）烘干。5、均勻噴上茚三酮—無(wú)水丙酮液，注意使溶液不倒流，不間斷。6、用吹風(fēng)機(jī)吹干，觀察層析點(diǎn)，確定其幾何中心。7、量取數(shù)值