氨基酸的分離鑒定—紙層析法

1、化學(xué)與生物工程學(xué)院生物工程系生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告課程名稱：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：氨基酸的分離鑒定—紙層析法實(shí)驗(yàn)室名：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)時(shí)間：20121115任課老師：楊艷專業(yè)班級：生物工程1142學(xué)生姓名：髙曄學(xué)號：201121030219組別：第五組【實(shí)驗(yàn)步驟】（1）檢查培養(yǎng)皿是否干燥、潔凈；若否，將其洗凈并置于干燥箱內(nèi)120℃烘干。（2）平衡：剪一大塊塑料薄膜鋪在桌面上，將層析缸或大燒杯到置于塑料薄膜上，再把盛有約5mL展層

2、溶液的小燒杯置于倒置的層析缸或大燒杯中，用塑料薄膜密封起來，平衡20min。（3）規(guī)劃：帶上手套，取寬約10cm、高約15cm的層析濾紙一張。在紙的下端距邊緣2～3cm處輕輕用鉛筆劃一條平行于底邊的直線A，在直線上做4個(gè)記號，記號之間間隔2cm，這就是原點(diǎn)的位置。另在距左邊緣1cm處畫一條平行于左邊緣的直線B，在B線上以A、B兩線的交點(diǎn)為原點(diǎn)標(biāo)明刻度（以厘米為單位），參見下圖。圖2實(shí)驗(yàn)裝置示意圖（4）點(diǎn)樣：用毛細(xì)管分別取10mL左右的氨

3、基酸樣品點(diǎn)在四個(gè)位置上。干后重復(fù)點(diǎn)樣，同一位置上需點(diǎn)2～3次，2～3mL次，保證每點(diǎn)在紙上擴(kuò)散的直徑最大不超過3mm。其中3個(gè)是已知樣，1個(gè)是待測樣品。（5）層析：用針、線將濾紙縫成筒狀，紙的兩側(cè)邊緣不能接觸且要保持平行，參見圖11。向培養(yǎng)皿中加入擴(kuò)展劑，使其液面高度達(dá)到1cm左右，將點(diǎn)好樣的濾紙筒直立于培養(yǎng)皿中（點(diǎn)樣的一端在下，擴(kuò)展劑的液面在A線下約1cm），罩上大燒杯，仍用塑料薄膜密封。當(dāng)擴(kuò)展劑上升到A線時(shí)開始計(jì)時(shí)，每隔一定時(shí)間測定

4、一下擴(kuò)展劑上升的高度，填入表1中。當(dāng)上升到15～18cm，取出濾紙，剪斷連線，立即用鉛筆描出溶劑前沿線，自然風(fēng)干或用電吹風(fēng)熱風(fēng)吹干。（6）顯色：用噴霧器在通風(fēng)廚中向?yàn)V紙上均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分鐘(100℃)或用熱風(fēng)吹干即可顯出各層析斑點(diǎn)。（7）計(jì)算各種氨基酸的Rf值，并判斷混合樣品中都有哪些氨基酸，各人將自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果貼在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上，見表2。（8）以層析時(shí)間為橫坐標(biāo)，擴(kuò)展劑上升高度為縱坐標(biāo)畫圖，求出擴(kuò)展劑