氨基酸的分離鑒定—紙層析法

1、化學與生物工程學院生物工程系生物化學實驗報告生物化學實驗報告課程名稱：生物化學實驗項目：氨基酸的分離鑒定—紙層析法實驗室名：生物化學實驗室實驗時間：20121115任課老師：楊艷專業(yè)班級：生物工程1142學生姓名：髙曄學號：201121030219組別：第五組【實驗步驟】（1）檢查培養(yǎng)皿是否干燥、潔凈；若否，將其洗凈并置于干燥箱內(nèi)120℃烘干。（2）平衡：剪一大塊塑料薄膜鋪在桌面上，將層析缸或大燒杯到置于塑料薄膜上，再把盛有約5mL展層

2、溶液的小燒杯置于倒置的層析缸或大燒杯中，用塑料薄膜密封起來，平衡20min。（3）規(guī)劃：帶上手套，取寬約10cm、高約15cm的層析濾紙一張。在紙的下端距邊緣2～3cm處輕輕用鉛筆劃一條平行于底邊的直線A，在直線上做4個記號，記號之間間隔2cm，這就是原點的位置。另在距左邊緣1cm處畫一條平行于左邊緣的直線B，在B線上以A、B兩線的交點為原點標明刻度（以厘米為單位），參見下圖。圖2實驗裝置示意圖（4）點樣：用毛細管分別取10mL左右的氨

3、基酸樣品點在四個位置上。干后重復(fù)點樣，同一位置上需點2～3次，2～3mL次，保證每點在紙上擴散的直徑最大不超過3mm。其中3個是已知樣，1個是待測樣品。（5）層析：用針、線將濾紙縫成筒狀，紙的兩側(cè)邊緣不能接觸且要保持平行，參見圖11。向培養(yǎng)皿中加入擴展劑，使其液面高度達到1cm左右，將點好樣的濾紙筒直立于培養(yǎng)皿中（點樣的一端在下，擴展劑的液面在A線下約1cm），罩上大燒杯，仍用塑料薄膜密封。當擴展劑上升到A線時開始計時，每隔一定時間測定

4、一下擴展劑上升的高度，填入表1中。當上升到15～18cm，取出濾紙，剪斷連線，立即用鉛筆描出溶劑前沿線，自然風干或用電吹風熱風吹干。（6）顯色：用噴霧器在通風廚中向濾紙上均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分鐘(100℃)或用熱風吹干即可顯出各層析斑點。（7）計算各種氨基酸的Rf值，并判斷混合樣品中都有哪些氨基酸，各人將自己的實驗結(jié)果貼在實驗報告上，見表2。（8）以層析時間為橫坐標，擴展劑上升高度為縱坐標畫圖，求出擴展劑