單細胞凝膠電泳對人類肝癌細胞的研究

1、通過單細胞電泳觀察受重離子輻射的人體肝癌細胞的通過單細胞電泳觀察受重離子輻射的人體肝癌細胞的DNA損傷損傷摘要摘要目的：目的：現(xiàn)在很多國家都已經(jīng)發(fā)展了癌癥的重離子療法，特別是在GSI(GesellschaftfurSchwerionenfschungmbH，Darmstadt，Germany)已經(jīng)取得了引人注目的成果，但是由于重離子運行方式的復雜性阻礙了實際運用，因此基礎理論仍然需要更深的研究。在這篇文章中，我們將使用單細胞凝膠電泳來測

2、量重離子輻射對于SMMC7721細胞的基因毒性。X射線、γ射線、紫外線以及快中子輻射造成的DNA損傷資料已經(jīng)相當完備，但是迄今為止關于重離子在這方面影響的研究很少。據(jù)此，我們嘗試通過彗星實驗來檢測重離子輻射對肝癌細胞的影響，同時建立一個臨床可用的重離子癌癥療法的數(shù)據(jù)庫。方法：方法：本次實驗所選用的材料是人體肝癌細胞，在中國蘭州重離子加速器接受80MEVU的輻射，劑量分別為00.5，1248Gy，然后立即使用凝?1020Ne膠電泳檢測DN

3、A損傷，每個劑量的樣品選取100150個細胞，記下慧尾的長度和數(shù)量，并用EXCLE分析數(shù)據(jù)。結果：結果：在受到0.5Gy到8Gy的輻射處理后，我們從彗星實驗圖像發(fā)現(xiàn)SMMC7721細胞都受到損壞?；畚驳拈L度和尾距都隨著劑量的增加而增加，而出現(xiàn)慧尾的細胞的數(shù)量也隨著劑量的增加而增多。當劑量達到2Gy時，接近100%的細胞都受到損傷。此外，慧尾的長度和距離都顯示出了線性關系。結論：結論：通過清晰的彗星實驗圖像，我們的實驗證明彗星實驗可以用來

4、測量重離子對DNA的損傷。同時DNA損傷和重離子的劑量有明顯的對應關系，而且SMMC7721細胞對有很大的輻射敏感度。劑量改變而引起DNA的不同的?1020Ne反應可以佐證彗星實驗對重離子誘變引起的DNA損傷檢測也是有效的。引言引言在過去的幾十年里，從基礎的物理、化學到生物腫瘤和實驗室放射療法開始逐步發(fā)展，輻射研究已經(jīng)成為一個專門的分支學科。雖然關于X射線和γ射線的放射生物學影響已經(jīng)有了廣泛的研究，但是關于重離子束的放射生物學影響的研究

5、卻少之又少。隨著人類足跡向外太空的邁進，關于高線性能量轉(zhuǎn)移的研究吸引了越來越多的目光。隨著二十世紀七十年代中期LBL首次運用重離子來治療癌癥，美國已經(jīng)得出了比傳統(tǒng)的軟組織瘤、骨癌、前列腺癌的放射療法更加有前途的結果。現(xiàn)在許多國家的科學家都已經(jīng)設計出加速器來產(chǎn)生重離子束并用于臨床治療，并且已經(jīng)開始進行一些重離子癌癥療法的初步研究，比如，碳、氖、氧和氬。堿性狀態(tài)下的彗星實驗是在奧斯汀和約翰遜的基礎上略作修改發(fā)展而來的，在進行電泳實驗時，取1

6、0μl新鮮的細胞懸液于Dulbecc氏磷酸鹽緩沖液中（Ph為7.4），然后與30μl0.5%低熔點瓊脂混合，混合后平鋪于覆蓋有0.5%正常熔點瓊脂的載玻片上，然后再蓋上蓋玻片（目的是在室溫下干燥來防止灰塵和其他粒子的干擾）。待低熔點瓊脂在冰箱中凝固十分鐘之后，小心的取下蓋玻片并將載玻片慢慢的浸入到剛制備好的細胞裂解液中。從操作開始到電泳的結束，所有的步驟都要避免陽光的照射。裂解11.5個小時之后，將載玻片放置到電泳儀中，6個樣品的18個

7、載玻片隨機放置在電泳槽中。在電泳緩沖液中進行2030分鐘的DNA解旋之后，然后在另一組緩沖液中進行單細胞凝膠電泳。在電泳結束后，使用0.4mol的磷酸酯進行中和化（pH=7.5）。DNADNA損傷評估損傷評估用溴化乙錠的水溶液對載玻片染色后，蓋上蓋玻片，使用放大倍速為1020倍的熒光顯微鏡觀察。同一個劑量的樣品數(shù)量為100150個細胞。記下慧尾的長度以及含有慧尾的細胞的數(shù)量，與此同時，用135號黑白底片照相。最后，使用EXCEL對數(shù)據(jù)加