機械牽張力與oxldl共同作用對巨噬細胞raw264.7mapks激活的影響

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文機械牽張力與oxLDL共同作用對巨噬細胞Raw264.7 MAPKs激活的影響姓名：汪照靜申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：李朝紅20090604機械牽張力對巨噬細胞M A P K s 的影響( 2 ) 一次性密度梯度離心法分離血漿中的L D L ( n a t i v eL D L ，n L D L ) ，用硫酸銅對其氧化，獲得o x L D L ；用瓊脂糖凝膠電泳鑒定分離的n L D L 和o

2、 x L D L 。( 3 ) 不同濃度的o x L D L 和機械牽張力分別作用于R a w 2 6 4 ．7 ，用W e s t e r n b l o t 的方法進一步檢測M A P K s 磷酸化水平的變化；( 4 ) 用o x L D L 和機械牽張力共同作用于R a w 2 6 4 ．7 ，W e s t e r n b l o t 的方法檢測M A P K s磷酸化水平的變化。結(jié)果：( 1 ) 光鏡下R a w 2 6 4

3、 ．7 細胞完全貼壁，界限清楚，呈圓形、橢圓形、扁梭形及不規(guī)則行，胞核呈圓形或卵圓形，位于細胞中央或略偏，胞質(zhì)內(nèi)可有空泡狀結(jié)構(gòu)存在，細胞分裂增殖，可出現(xiàn)短細或鈍圓的突起；墨汁染色后胞內(nèi)有墨汁斑塊或墨汁顆粒存在，或者有淡染呈云霧狀的黑色存在。( 2 ) 一次性密度梯度離心后，在密度液中問隔出現(xiàn)極低密度脂蛋白( v L D L ) 、低密度脂蛋白( L D L ) 、高密度脂蛋白( H D L ) 和無脂血漿蛋白條帶，分界清晰；瓊脂糖凝膠電

4、泳顯示L D L 和o x L D L 泳道在血漿B 脂蛋白處出現(xiàn)單一的條帶，并且o x L D L 的遷移率明顯較L D L 的高。( 3 ) o x L D L 和機械牽張力可以分別引起R a w 2 6 4 ．7E R K l ／2 、J N K l ／2 、p 3 8 磷酸化水平的增加，呈時間及濃度依賴性。( 4 ) 機械牽張力與o x L D L 共同作用時，R a w 2 6 4 ．7 中E R K l ／2 、J N K

5、l ／2 磷酸化水平明顯增強，p 3 8 磷酸化水平增強不明顯。結(jié)論：( 1 ) 在本實驗室培養(yǎng)條件下的R a w 2 6 4 ．7 具有典型的巨噬細胞形態(tài)特點和吞噬功能，可以用于后續(xù)實驗研究。( 2 ) 本實驗室自行制備的o x L D L 氧化程度及純度均較高，可以滿足后續(xù)實驗所需。( 3 ) o x L D L 和機械牽張力可分別增加R a w 2 6 4 ．7E R K l ／2 、J N K l ／2 、p 3 8 的磷酸化水