機械牽張力與晚期糖基化終末產物協同促進小鼠血管平滑肌細胞MAPKs激活的研究.pdf

1、目的：
　　 用機械牽張力(Strech stress)和/或晚期糖基化終末產物(advanced glycation end products，AGEs)刺激體外培養(yǎng)的小鼠動脈血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)，研究機械牽拉力和/或晚期糖基化終末產物對VSMCs生物學行為的影響及其分子機制，探討高血壓與糖尿病協同促進血管重構(vascular remodeling，VR)發(fā)生

2、的機制。
　　 實驗方法：
　　 (1)體外分離小鼠主動脈中膜，組織塊貼壁法原代培養(yǎng)VSMCs，并進行形態(tài)學和生物化學鑒定(分別用光鏡、電鏡和Westernblot等方法)。
　　 (2)將BSA和葡萄糖按一定比例溶解在磷酸緩沖液中，進行透析后孵育，獲得AGE-BSA；用瓊脂糖凝膠電泳和熒光光度法鑒定糖基化的AGE-BSA和BSA。
　　 (3)用不同濃度或時間點的AGEs作用于VSMCs，用Wester

3、n blot的方法檢測MAPKs的激活；
　　 (4)用不同強度或作用時間的機械牽張力作用于VSMCs，用Western blot的方法檢測MAPKs的激活；
　　 (5)用AGEs和機械牽張力共同作用于VSMCs，用Westernblot的方法檢測MAPKs的激活。
　　 結果：
　　 (1)7天左右有細胞從組織塊中長出，14天鋪滿培養(yǎng)瓶。細胞呈長梭型和谷峰樣的外觀，細胞表達平滑肌特異抗原α-actin

4、(SM-α-actin)。
　　 (2)孵育8w后，獲得的AGE-BSA呈棕色，BSA呈透明；經電泳分離后，用考馬斯亮藍染色，顯示AGE-BSA對應的條帶分子量大于BSA，遷移率相對的較BSA慢；經熒光光度法鑒定，可見用370nm單光入射激發(fā)AGE-BSA后，可見其在440～450nm處呈現峰值，其熒光強度是BSA的6-13倍。
　　 (3)Western blot顯示：機械牽拉力和AGEs均可以導致血管平滑肌細胞細胞內