尾加壓素Ⅱ介導晚期糖基化終末產(chǎn)物促進大鼠血管外膜成纖維細胞表型轉化.pdf

1、背景及目的：糖尿病作為心血管病重要的危險因素之一，嚴重危害人類身體健康。糖尿病患者機體內(nèi)代謝產(chǎn)物晚期糖基化終末產(chǎn)物(Advanced glycation end products，AGEs)則被證實與糖尿病慢性血管并發(fā)癥相關，如動脈粥樣硬化(Atherosclerosis, AS)。動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展受多種因素的影響，而血管外膜成纖維細胞(Vascular adventitial fibroblasts，AFs)向內(nèi)膜遷移可能是其致

2、病因素之一。近期研究表明，AGEs可促進血管外膜成纖維細胞遷移。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，尾加壓素II(Urotensin II，UII)作為一種新的縮血管活性肽，同樣能夠激活血管外膜成纖維細胞，促進其表達α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)，從而轉化為肌成纖維細胞(Myofibroblasts，MFs)，獲得遷移能力。臨床實驗發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者UI I水平較非糖尿病患者明顯升高；在糖尿病大鼠模型上，抑

3、制AGEs生成伴隨著UII水平的下降。然而，AGEs和UII兩者在促進動脈粥樣硬化過程中是否存在相互作用，尚未闡明。為此，本課題在離體培養(yǎng)的大鼠AFs上，探討了AGEs對UII表達的刺激作用，并探討了UII能否介導AGEs促進大鼠AFs發(fā)生表型轉化。
　　方法：采用組織貼塊法，體外培養(yǎng) SD大鼠主動脈血管外膜成纖維細胞，實驗使用3-5代細胞，無血清1640培養(yǎng)液同步培養(yǎng)24h后，按以下方案進行：(1)細胞予以AGEs(200mg/

4、l)共孵育48小時，制作細胞爬片，采用免疫細胞化學法測定UII表達變化。（2）AGEs(200mg/l)以時間梯度(0-48h)刺激已同步化 AFs，采用蛋白免疫印跡實驗法(Western-blot)測定細胞α-SMA變化；（3）為了探討UII受體拮抗劑對上述作用的影響，預先加入UII受體阻斷劑urantide(10-5mmol/l)，30分鐘后再加入AGEs(200mg/l)共同培養(yǎng)48小時，采用蛋白免疫印跡實驗法(Western-b

5、lot)測定細胞α-SMA變化。
　　結果：
　　1.免疫細胞化學法表明：AGEs可促進大鼠主動脈外膜成纖維細胞表達UII水平。
　　2.Western-blot表明，AGEs能促進AFs表達α-SMA。AGEs(200mg/l)分別刺激細胞6h、12h、24h和48h后，α-SMA表達較對照組分別增加26.8％（P>0.05）、89.66%（P>0.05）、96.28%(P>0.05)和185.79%(P<0.05)

6、。另取細胞，分為對照組、AGEs(200mg/l)組及AGEs(200mg/l)+Urantide(10-5mmol/l)組，刺激細胞48h后，AGEs(200mg/l)組α-SMA表達量較對照組增加132.88%(P<0.05)，而 AGEs(200mg/l)+Urantide(10-5mmol/l)組較AGEs(200mg/l)組α-SMA表達減少44.84%(P<0.05)。
　　結論：晚期糖基化終末產(chǎn)物可促進大鼠主動脈外膜