骨橋蛋白在尾加壓素Ⅱ誘導大鼠血管外膜成纖維細胞遷移中的作用.pdf

1、目的：探討骨橋蛋白（OPN ） 在UII誘導血管外膜成纖維細胞(Afs )遷移中的作用， 并觀察U II刺激血管外膜成纖維細胞Afs產生OPN的影響。
　　 方法：取6-8周齡雄性SD大鼠，迅速處死，開胸腔后輕柔的取出胸主動脈，并分離出胸主動脈外膜，將其剪碎，貼片于培養(yǎng)皿底部，用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，使用3至5代的細胞。研究OPN在U II促進Afs 遷移中的作用，運用Transwell觀察反義OPN在U II誘

2、導的Afs遷移中的作用。將培養(yǎng)的血管Afs分成：⑴對照組；⑵UII 刺激組；⑶U II+反義組(antisence,AS)；⑷U II+錯配義組(mismatch，M) ；⑸U II +正義組(sense，S)。觀察對照組、UII刺激組和反義組遷移至濾膜外表面的細胞數，用棉簽將濾膜內表面細胞擦去，膜外表面用甲醇固定2min，HE染色后在200倍顯微鏡下計數，每張膜取5個視野，取其平均值，研究U II對外膜成纖維OPN 表達的影響，將培養(yǎng)

3、的血管Afs分成：①對照組；②刺激組，用U II刺激Afs ，建立時間和濃度曲線，觀察UII刺激后OPN 的表達，通過免疫印跡方法檢測OPN 含量。統(tǒng)計學方法采用單因素方差分析，組間兩兩比較應用t 檢驗，結果用平均值±標準差(x ±s) 表示，以P ≤ 0. 05 為有統(tǒng)計學差異。
　　 結果：在體外培養(yǎng)的SD大鼠血管Afs ，U II能夠以濃度和時間依賴方式促進OPN 的表達。將細胞與10-8mol/ L 的U II共孵育24

4、h后，OPN蛋白表達與對照組相比增加70％ ( P< 0.05)；在細胞遷移實驗中，U II 刺激組細胞遷移數目明顯高于對照組（31.50±6.27 vs17.75±3.96，P < 0.01），轉染反義OPN核苷酸序列能夠明顯抑制U II誘導的血管Afs遷移細胞數目（20.35±0.96 vs 31.50±6.27, P <0.05) ,而OPN正義組、錯配義組與刺激組相比，差別無統(tǒng)計學意義。
　　 結論：上述結果表明UII能