尾加壓素II促進大鼠血管外膜成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化和遷移作用及其細胞內(nèi)機制研究.pdf

1、背景:尾加壓素II(Urotensin II,UII)是由11個氨基酸殘基組成的神經(jīng)環(huán)肽,最早是從硬骨魚脊髓尾部下垂體(urophysis)中分離出來,UII是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的最強的一種血管活性肽,其收縮血管效應(yīng)甚至超過ET-1。UII廣泛存在于從軟體動物到哺乳動物體內(nèi),其特異性受體為GPR14,亦稱為UT,目前已經(jīng)在人體內(nèi)分離出這種受體。UII具有許多生理學效應(yīng),例如刺激人內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞和心肌成纖維細胞增殖,促進心肌成纖維細胞的

2、I型、III型膠原蛋白和纖維連接蛋白的分泌,除此之外,UII還能促使新生大鼠心肌肥大。提示其在血管重塑中起到了重要的作用。然而 UII對血管外膜成纖維細胞( adventitial fibroblast, AF)表型轉(zhuǎn)變和遷移的作用尚未闡明
　　目的:研究尾加壓素II對大鼠血管外膜成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化、膠原分泌和遷移的影響及其信號轉(zhuǎn)導機制。
　　方法:使用貼塊法培養(yǎng)大鼠胸主動脈血管外膜成纖維細胞,使用尾加壓素II和各種信號轉(zhuǎn)導

3、通路阻斷劑來刺激血管外膜成纖維細胞,分別通過蛋白免疫印跡試驗(Western blotting),酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),細胞遷移試驗(transwell technique)來測定血管外膜成纖維細胞中α-平滑肌激動蛋白(α-SM-Actin)的表達,I型膠原蛋白的分泌和細胞遷移。
　　結(jié)果:UII以時間和濃度依賴的方式刺激血管外膜成纖維細胞表達α-SM-Actin,采用10-8M分別刺激成纖維細胞4、16、和24小時后,

4、細胞α-SM-Actin表達隨刺激時間延長而逐漸增加,分別較對照組高22.45％、52.25%和100.56%(P<0.01)。此外,UII尚可以濃度依賴方式刺激α-SM-Actin表達,10-10、10-9、10-8、10-7和10-6M UII組分別較對照組高12.6%(P>0.05),31.73%(P<0.05),79.00%(P<0.01),65.31%(P<0.01)和59.26%(P<0.01)。UII能夠被促有絲分裂蛋白激

5、酶(MAPK)阻斷劑PD98059、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶阻斷劑CSA、Rho激酶阻斷劑Y227632、PKC阻斷劑H7以及鈣通道阻斷劑Nicardipine所抑制。結(jié)果還發(fā)現(xiàn),UII能夠以濃度依賴性方式促進I型膠原蛋白分泌。其中10-10M UII組刺激作用不明顯(P>0.05),10-9、10-8、10-7-6和10 M UII組分泌量明顯增加,分別較對照組高32.11%(P<0.01)、41.04%(P<0.01)、42.60%(P<0.

6、01)、35.19%(P<0.01)。該作用同樣能夠被促有絲分裂蛋白激酶(MAPK)阻斷劑PD98059、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶阻斷劑CSA、Rho激酶阻斷劑Y227632、PKC阻斷劑H7以及鈣通道阻斷劑Nicardipine所抑制,其中H-7抑制作用最為明顯(P<0.01)。10-10M組刺激遷移作用并不明顯,但隨著UⅡ濃度增加, UⅡ促進細胞遷移的作用明顯增強,呈濃度依賴性,在10-8 M時作用達到高峰( P<0.01)。而10-7 M和

7、10-6 M UⅡ組效應(yīng)雖然明顯高于對照組(均為P<0.01),卻低于10-8 M組。10-9 M、10-8-7-6M、10 M和10 M UⅡ組遷移分別較對照組增加2.5、4.7、2.9和3.1倍。UⅡ的作用能夠被促有絲分裂蛋白激酶阻斷劑PD98059、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶阻斷劑CSA、Rho激酶阻斷劑Y227632以及PKC阻斷劑H7所抑制,抑制率分別為41.9%、77.4%、65.4%和78.6%( P<0.01)。然而,盡管鈣通道阻斷

8、劑nicardipine組細胞遷移較UⅡ組減少15%,但無統(tǒng)計學意義( P>0.05)。
　　結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)UII能夠以濃度方式促進血管外膜成纖維細胞表達α-SM-Actin,向肌成纖維細胞表形轉(zhuǎn)化,并促進成纖維細胞分泌I型膠原。這些作用可以通過促有絲分裂蛋白激酶MAPK、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶、Rho以及PKC,鈣通道等途徑來實現(xiàn)。同時UⅡ也是是一種新的促進血管外膜成纖維細胞遷移的活性因子,該作用可通過PKC、促有絲分裂蛋白激酶、鈣調(diào)