ERK和Akt信號通路參與了晚期糖基化產(chǎn)物誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞自噬.pdf

1、背景：
　　 晚期糖基化產(chǎn)物(Advancedglycationendproducts，AGEs)是非酶糖化反應(yīng)的終末期產(chǎn)物，正常人隨著年齡的增加，AGEs會緩慢增加，但糖尿病病人由于長期高血糖狀態(tài)，導(dǎo)致體內(nèi)糖化反應(yīng)及AGEs生成加速。已有多項研究表明AGEs是引起糖尿病血管并發(fā)癥的重要誘因之一。AGEs能夠在糖尿病病人血管壁沉積，促進內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和血管平滑肌細(xì)胞(vascularsmoothmusclecells，VSMCs)

2、增殖，從而加速動脈粥樣硬化的形成。自噬是一種溶酶體依賴的細(xì)胞內(nèi)受損細(xì)胞器或代謝產(chǎn)物的降解過程，其作為細(xì)胞的防御保護機制，與細(xì)胞凋亡之間有密不可分的聯(lián)系。但關(guān)于AGEs與自噬之間可能存在的病理生理關(guān)系，目前尚不清楚。本文研究以研究自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ的表達作為衡量自噬水平的主要指標(biāo)，初步研究了AGEs誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞自噬的相關(guān)機制及其在AGEs誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞增殖中的作用。為臨床上防治糖尿病合并動脈粥樣硬化開辟新的途徑。
　　 目的

3、：
　　 明確自噬機制在AGEs誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖過程中的作用。探討AGEs誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞自噬的相關(guān)信號通路機制以及晚期糖基化產(chǎn)物受體(receptorforadvancedglycationendproducts，RAGE)在其中的作用。
　　 方法：
　　 WesternBlotting檢測AGEs處理大鼠血管平滑肌細(xì)胞A7R5后自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ，MAPK通路相關(guān)蛋白，Akt/mTOR通路相關(guān)

4、蛋白，RAGE的表達，免疫熒光檢測AGEs處理A7R5細(xì)胞后自噬相關(guān)蛋白LC3的表達，電鏡技術(shù)檢測AGEs處理A7R5細(xì)胞后自噬體的表達。四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測平滑肌細(xì)胞的增殖，RAGE小干擾RNA(siRNA)轉(zhuǎn)染前后A7R5細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ的表達變化。
　　 使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料實驗數(shù)據(jù)以x±s表示，數(shù)據(jù)錄入SPSS17.0完成統(tǒng)計分析，兩組之間比較采用配對t檢驗，組間比較采

5、用one-wayANOVA。以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異，P<0.01為有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)果：
　　 AGEs處理VSMCs后，自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ的表達顯著上調(diào)并呈時間濃度依賴性，電鏡觀察到細(xì)胞內(nèi)自噬體數(shù)量增加，免疫熒光觀察到胞漿內(nèi)出現(xiàn)LC3顆粒；與對照組比較，AGEs處理組平滑肌細(xì)胞增殖能力增加，自噬抑制劑3-MA預(yù)處理的AGEs組細(xì)胞增殖能力被抑制。AGEs能夠激活ERK，JNK，P38的磷酸化水平，同

6、時抑制Akt，mTOR的磷酸化水平。分別使用ERK抑制劑PD98059，JNK抑制劑SB203580,P38抑制劑SP600125，Akt激活劑IGF-1預(yù)處理后，只有PD98059預(yù)處理組和IGF-1預(yù)處理組能夠抑制AGEs誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞自噬。用RAGE-siRNA干擾A7R5細(xì)胞RAGE的表達后，AGEs誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ表達增高現(xiàn)象被抑制。
　　 結(jié)論：
　　 本實驗以大鼠血管平滑肌細(xì)胞系A(chǔ)7