藥學專業(yè)畢業(yè)論文外文翻譯--通過合成氟代嘧啶核苷競爭性抑制人多聚(a)特異性核糖核酸酶(parn)

1、中文 中文 8900 字 出處： 出處：Balatsos N A A, Dimitrios V, Panagiotis M, et al. Competitive inhibition of human poly(A)-specific ribonuclease (PARN) by synthetic fluoro-pyranosyl nucleosides.[J]. Biochemistry, 2009, 48(26):6044-5

2、1.本科畢業(yè)論文(設計)外文翻譯譯文： 譯文：通過合成氟 通過合成氟代嘧啶 代嘧啶核苷競爭性抑制人多聚 核苷競爭性抑制人多聚(A)特異性 特異性核糖核酸酶 核糖核酸酶(PARN)Competitive Inhibition of Human Poly (A)-Specific Ribonuclease (PARN) by Synthetic Fluoro-Pyranosyl Nucleosides摘要 摘要：聚（A）特異性核糖核酸酶（P

3、ARN)是一種獲得性相互影響的脫腺苷，這個脫腺苷酶是居間的，和其它外切核酸酶類連接在一起，參與真核信使 RNA的翻譯表達，因而它能積極參與有規(guī)律的基因的表達。到目前為止，氨基糖苷類和自然核苷酸是唯一報道的人類 PARN 活動的調節(jié)器。在現(xiàn)在的研究中，我們發(fā)現(xiàn)合成的核苷類似物連接一個氟代嘧啶核苷的糖基和苯甲酰修飾的胞嘧啶或腺嘌呤作為基本官能團能有效地抑制人類 PARN。如以前所報道，當對多種腫瘤細胞系進行測試時，這種核苷類似物表現(xiàn)出很大的

4、抑制作用。動力學分析表明，對 PARN 的抑制是有競爭性的，并不能通過改變外切核糖核酸酶類鎂（Ⅱ）的濃度來釋放。此外，用乙酰和/或糖基三苯甲基來替代糖基上 2′，4′或6′的 OH 是抑制效果的關鍵。要了解核苷如何準確的進入 PARN 活性部位，通過分子動力學模擬之后我們對分子進行對接。在硅片分析表明，這些化合物能有效地進入 PARN 活性中心。我們的研究結果支持這一想法即通過起催化作用的氨基酸殘基的相互作用使糖基介導的穩(wěn)定的核苷到達活

5、躍的部位。兩者合計，在體外和硅片的數(shù)據(jù)表明，我們人類 PARN 分子之間的目標是通過降低信使 RNM 的周轉率而使這些化合物可發(fā)揮治療作用，從而解釋其在分子水平上的已知的體內抑制作用。脫腺苷化是鎂（Ⅱ）依賴的外切核糖核酸酶類，它可以不斷裂解多聚（A）的末端，并釋放 5′平滑肌磷酸酶[1]。在所有的脫腺苷，聚（A）特異性核糖核酸酶（PARN） 是獨一無二的，因為它可以在脫腺苷化期間與 5′帽結構和可以進入活動現(xiàn)場。生化和在硅片的三維模型分

6、析顯示這三個糖羥基在高效抑制作用方面是重要的角色。我們的數(shù)據(jù)表明，在本研究中所使用的類似物鉛化合物可作為服務于發(fā)展的新可能的PARN抑 制劑和其他基本 deadenylases 與新的治療方法的潛力用。材料與方法材料 所有化學品包括嘌呤核苷酸和脫氧核苷酸，亞甲基藍，polyadenylic 酸鉀鹽（平均粒徑 300 腺苷，巴士 A300）來自 SigmaAldrich. 核苷類似物的合成。氟代嘧啶核苷合成如前所述（31）。 簡單地說，凝

7、結 1′，2′，4′，6′-四- O -乙?；? 3′-脫氧-3′-氟-葡萄糖胞嘧啶，silyated N4-苯甲酰胞嘧啶，或 N6-苯甲酰腺嘌呤造成的[1 的生產(chǎn)-（2′，4′，6′三-O-乙?；?3′-脫氧-3′-氟-β-D-吡喃葡萄糖-N4-苯甲酰胞嘧啶]（5 條）或[9-（2′，4′，6′三-O-乙?；?3′-脫氧- 3′-氟-β-D-吡喃葡萄糖）- N6-苯甲酰（±1）腺嘌呤]，分別來說，在場的三甲基硅三氟甲烷磺酸鈉

8、和錫氯化物。脫保護的第 5 條與氫氧化鈉乙醇吡啶格 A1 分別產(chǎn)生[1-（3′，4′-脫氧- 3′-氟-β-D-吡喃葡萄糖）]胞嘧啶（C6）的，[1 -（3′4′-脫氧-3′-氟-β-D-吡喃葡萄糖）- N4-苯甲酰胞嘧啶]（A6 的） ，或[9 -（3′，4′-脫氧-3′-氟-β-D-吡喃葡萄糖）-N6-苯甲?；汆堰蔧（A2）的。A2 的治療和干 2，2-二甲氧基丙烷，N，N-二甲基甲酰胺，通過乙酰化后的自由羥基集團在 2′位的糖基

9、醋酸酸酐/吡啶，去除異亞丙基，而且，最后，選擇性保護的主要 6′ -羥基組一組取得了三苯甲基化合物 A4。氧化的氟乙?；绑w A4 與吡啶踵鉻酸鹽/乙酸酐給予[9-（3′-脫氧-3′-氟-6′-O 型三苯甲基-β-D-glycerohex-2′-enopyranosyl-4′ -ulose）]- N6-苯甲酰基腺嘌呤（A 3）。 表達和純化重組 PARN。 質粒編碼的全尺寸 74 kDa 的人類 PARN（Virtanen 教授提供

10、的，UppsalaUniversity，瑞典） （用于 N-末端 His6 標簽的多肽表達） ，被傳遞給BL21（ DE3） 細 胞去表達重組蛋白，如前所述[33]，加入一些修改。簡單地說，菌落生長在 37℃過夜的卡那霉素（50 ul/ml）。培養(yǎng)物在（1:100）稀釋后在相同的 37℃被異丙基-1-硫代-β-的D-半乳糖苷（IPTG）誘導的一個最終的濃度 0.1mm 的培養(yǎng)基中生長。用于 PARN 表達的培養(yǎng)液被允許在37℃下培養(yǎng)

11、3 小時。在 4℃下經(jīng)離心法收集細胞要 20 分鐘，和顆粒被凍結在- 70℃。表達了他的標記可溶性蛋白進行純化下列先前描述協(xié)議[33]。PARN 活性測定和動力學分析。如所述前[34]，酶的活性可以被亞甲藍所測定。作為時間函數(shù)脫腺苷酶率被確定用時間進程分析（圖 1）。亞甲藍是由1.2mg 的亞甲藍溶解在 100ml 的 3-嗎啉基丙磺酸緩沖液中制備而成的（0.1m 的3-嗎啉基丙磺酸-氫氧化鉀，pH 值 7.5 和 2mmEDTA）。標