獸醫(yī)生物制品學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)講義

1、1獸醫(yī)生物制品學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)講義 獸醫(yī)生物制品學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)講義實(shí)習(xí)一、弗氏佐劑的制備 實(shí)習(xí)一、弗氏佐劑的制備目的及要求 目的及要求掌握弗氏佐劑的制備方法及檢驗(yàn)方法。內(nèi)容與方法 內(nèi)容與方法弗氏佐劑是目前最常用的油乳佐劑，根據(jù)佐劑中加入或不加入死結(jié)核桿菌可分為弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑。在滅活疫菌苗的制備過程中常用油乳佐劑，即“弗氏不完全佐劑” 。下面我們主要介紹弗氏不完全佐劑的制備方法。一、材料和設(shè)備： 一、材料和設(shè)備：1、 材料：7#白油、

2、硬脂酸鋁、司班——80、吐溫——80、蒸餾水等。2、 設(shè)備：乳化泵、分析天平、離心機(jī)（4000r/min） 、恒溫培養(yǎng)箱、粘度計(jì)、高壓滅菌鍋、量杯、量筒、燒杯、試管、吸管（出液口徑 2mm）等。二、方法 二、方法：使用不同乳化劑和不同的配合比例及乳化方法，決定了制備乳劑的性狀和穩(wěn)定性。疫苗生產(chǎn)中主要有兩種基本方法。1、劑在水中法 劑在水中法 此法將乳化劑直接溶于水中，在激烈攪拌下將油加入，可直接生成O/W 乳劑。若欲得 W/O 型，可

3、繼續(xù)加入油，直到發(fā)生變型。該法通常用勻漿器或膠體磨，高速攪拌而得到較好的乳劑。2、劑在油中法 劑在油中法 此法將乳化劑溶于油相，將油相直接加入水相中得 O/W，如水相直接加入油相，得到 W/O 型，如欲得 O/W，繼續(xù)加入至變型。該法制成的乳劑，一般均勻顆粒直徑在 0.5um 左右，比較穩(wěn)定。3、油乳劑配方 油乳劑配方 免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用的佐劑配方：7#白油 85ml，司班——80 15ml 混合后經(jīng)除菌過濾而成為弗氏不完全佐劑（FIA）

4、；如向其中加入 0.5mg/ml 死結(jié)核桿菌即為弗氏完全佐劑（FCA） 。使用時(shí)，將含抗原的水相，與上述任一佐劑等量混合，用力振搖即可成為均勻的乳劑。疫苗生產(chǎn)用乳劑配方：7#白油 90ml，司班——80 10ml，混合后加 2ml 的吐溫——80 和 1.5g 的硬脂酸鋁，經(jīng)高壓滅菌后備用，使用前將配好的油佐劑與抗原水相 1∶1 混合，強(qiáng)力振搖，或通過膠體磨攪拌即可制成性狀良好的乳劑疫苗。大量生產(chǎn)乳劑疫苗時(shí)，可將 94%白油與 6%司班

5、——80 混合后加入 2%的硬脂酸鋁，經(jīng)滅菌后為油相；抗原液加入 2%的吐溫——80 為水相。乳化時(shí)，按容量計(jì)算，油相與水相1∶1 配制，先緩速混合，再通過乳化泵或膠體磨充分乳化，可獲得穩(wěn)定的油包水乳劑苗。但這種配方制的乳劑苗一般較粘稠，而且必須充分掌握混入抗原時(shí)的速度，在慢速攪拌油相的同時(shí)，緩慢傾入水相混合，然后再高速通過膠體磨或乳化泵充分乳化，否則易于分層。如欲降低乳劑的粘稠度，可以增加油相的比例，例如以水與油之比達(dá) 1∶2 或 1

6、∶3，最高可達(dá) 1∶4 時(shí)，亦可獲得良好的 W/O 乳劑疫苗?；蛘邔⒄吵淼?W/O 乳劑疫苗，再加2%吐溫——80 生理鹽水，通過攪拌或乳化泵乳化，可制成雙向乳劑疫苗（水—油—水乳劑）也可直接制備雙向乳劑苗（或稱多型乳劑 Multiple emulsion abjuvant） 。雙向乳劑苗的優(yōu)點(diǎn)是：粘稠度低、在注射部位易分散、局部反應(yīng)輕微及佐劑效應(yīng)良好等。三、油乳劑的檢驗(yàn) 三、油乳劑的檢驗(yàn)：3意在用花生油時(shí)，必須精制以除去花生蛋白，決不

7、允許含有黃曲霉毒素。礦物油佐劑的缺點(diǎn)是：①礦物油在組織中因不能代謝而長(zhǎng)期存在，造成局部組織損傷；②有污染致癌性多芳香烴化合物的危險(xiǎn)，限制了弗氏佐劑只應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及一些獸用疫苗。對(duì)乳化佐劑，即水——油——水（W/O/W）乳劑，是將水油劑疫苗再乳化到一種生物學(xué)安全的去污劑中（Tween ——80） 。雙乳化佐劑與一次乳化佐劑具有同等抗原性而易于吸收，更為穩(wěn)定，粘性較小，只是在注射部位引起小硬結(jié)。應(yīng)用甘油、卵磷脂佐劑，由于這種佐劑成分是機(jī)體