板藍根多糖的提取和純化工藝研究

1、乙醇體積分數(shù)為 30%的鹽酸乙醇溶液作為溶劑 ,超聲 60 m in。鹽酸川芎嗪得率為 0. 560 4 mg/g 。超聲提取技術(shù)是近年來應(yīng)用在中草藥有效成分提取分離方面的一種新型技術(shù)。利用超聲波產(chǎn)生的強烈空化效應(yīng)、 強烈振動、 熱效應(yīng)、 攪拌作用 ,可以加速藥物有效成分進入溶劑 , 從而提高提取效率 ,縮短提取時間 ,節(jié)約溶劑 ,并且避免了高溫對提取成分的破壞。與常規(guī)的煎煮法、 蒸餾法、 溶劑浸提法相比 ,超聲法具有提取溫度低、 產(chǎn)物

2、生物活性高、 溶劑使用量少、 操作簡便、 省時節(jié)能等優(yōu)點。 因此超聲波技術(shù)在中草藥有效成分提取分離的應(yīng)用研究方面具有重要意義。參考文獻 :[ 1 ] 胡國芬 ,王建平. 川芎嗪的藥理作用及臨床應(yīng)用進展 [ J ]. 中國藥物與臨床 , 2006, 6 (10) : 773.[ 2 ] 粱愛群. 川芎嗪的藥理及機理研究 [ J ]. 時珍國醫(yī)國藥 , 2005, 16(6) : 532.[ 3 ] 劉永明 ,李桂芝 ,張 慧 ,

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4、取工藝的發(fā)展研究 [ J ]. 重慶工商大學學報 (自然科學版 ) , 2005, 22 (3) : 233.[ 7 ] 化學藥品地方標準上升國家標準 ,第 5冊 [ S]. WS - 10001 - (HD- 0455) - 2002 : D5 - 199.[ 8 ] 劉振學 ,黃仁和 ,田愛民. 實驗設(shè)計與數(shù)據(jù)處理 ,第 1版 [M ]. 北京 :化學工業(yè)出版社 , 2005: 62.收稿日期 : 20082 102 15;

5、 修訂日期 : 20092 012 06基金項目 :河南省重大科技攻關(guān)項目 (No . 0422031200) ;河南工業(yè)大學博士科研基金項目作者簡介 :張體祥 (19662 ) ,男 (漢族 ) ,河南鄭州人 ,現(xiàn)任河南工業(yè)大學講師 ,主要從事天然產(chǎn)物化學的研究工作.3 通訊作者簡介 :劉 捷 (19702 ) ,女 (漢族 ) ,河南鄭州人 ,現(xiàn)任河南工業(yè)大學化學與化學工程學院副教授 ,博士學位 ,主要從事天然產(chǎn)物化學的研究工作

6、.板藍根多糖的提取和純化工藝研究張體祥 ,劉 捷3 ,張 萍 ,馬 麗 ,盧 奎(河南工業(yè)大學化學與化學工程學院 ,鄭州 河南 450001)摘要 :目的 研究板藍根水溶性多糖的提取純化工藝條件。方法 通過正交實驗 ,考察液料比、 提取時間、 提取溫度、 醇沉時間、 醇液比對多糖得率的影響。結(jié)果 液料比是影響提取工藝的主要因素 ,最佳工藝條件為 :液料比 30∶1,提取溫度90℃,提取時間 6 h。三氯乙酸法脫蛋白 ,

7、葡聚糖凝膠柱層析純化分離。結(jié)論 板藍根多糖得率 25. 63% ,多糖含量76. 42%。純化后的板藍根多糖為分子大小均一的單一組分多糖 ,不含核酸和蛋白質(zhì)。 關(guān)鍵詞 :板藍根多糖 ; 正交試驗 ; 提取 ; 純化 ; 分離中圖分類號 : R284. 2 文獻標識碼 : B 文章編號 : 10082 0805 (2009) 082 19922 03板藍根為中國傳統(tǒng)中藥 ,有清熱解毒、 涼血利咽的功能。用于瘟毒發(fā)斑

8、、 舌絳紫暗、 痄腮、 喉痹、 爛喉丹痧、 大頭瘟疫、 丹毒、 癰腫等癥[1 ]。板藍根多糖是板藍根的主要化學成分之一。研究發(fā)現(xiàn) , 板藍根多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用 , 對特異性免疫和非特異性免疫均有一定的促進作用[2, 3 ] , 此外還有降血脂作用。 隨著人們對多糖生物活性和特殊藥用功能認識的進一步加深 ,意識到板藍根多糖可能是板藍根生物活性和特殊藥用功能的主要作用因子之一。目前 , 板藍根多糖的提取大多采用水煮醇沉法[4, 5 ] ,

9、 提取的粗多糖溶液為膠體溶液 , 性質(zhì)差別很大 , 提取得率和多糖含量并不理想 ,這為多糖的的進一步開發(fā)造成了困難。為了提高多糖的活性 , 本實驗以北板藍根為原料 , 采用正交實驗對板藍根的提取工藝進行優(yōu)化 , 對提取的粗多糖脫蛋白 , 通過 Sehadex G -100凝膠色譜柱進一步分離純化 , 以期為板藍根多糖的開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。1 材料板藍根 ,購自鄭州仟僖堂藥店。2 方法2. 1 板藍根多糖的提取純化工藝路線[6,

10、 7 ] 其流程如下所示 :提取 :板藍根 → 粉碎 → 稱量 → 乙醚脫脂 → 熱水浸提 → 離心取上清液 → 殘渣重復(fù)浸提兩次 → 合并上清液 → 減壓濃縮 → 透析 →測含糖量 → 乙醇沉淀 → 有機溶劑洗滌 → 真空干燥 → 板藍根粗多糖純化 :粗多糖溶液 → Sehadex G - 100柱層析 → 洗脫液濃縮→ 乙醇沉淀 → 冷凍干燥 → 精制板藍根多糖2. 2 正交實驗優(yōu)化板藍根多糖的提取工藝 選擇液料比、 提取溫度和提取

11、時間 3個因素 ,以多糖得率為考察指標進行 3因素 3水平的正交實驗 ,對板藍根多糖的提取工藝條件進行優(yōu)化。2. 3 多糖含量的測定[8 ] 苯酚 - 硫酸法 ,以葡萄糖為基準物作標準曲線。根據(jù)標準曲線計算多糖含量。板藍根多糖得率的計算公式 :粗多糖得率 ( % ) = 多糖質(zhì)量板藍根粉末的質(zhì)量 × 100%2. 4 脫蛋白方法 稱取一定量板藍根粗多糖 ,加入蒸餾水溶脹 2h,在 100℃ 下煮沸 1. 5 h,離心

12、,濃縮。本實驗采用了 4種去蛋白方法 :Sevage法 :在粗多糖濃縮液中加入等體積的一定濃度的氯仿- 正丁醇溶液 ,混合振搖 ,離心除去沉淀 ,經(jīng)透析、 醇沉、 洗滌、 干燥 ,即得脫蛋白多糖。三氯乙酸法 :在粗多糖濃縮液中滴加一定量的三氯乙酸 ,劇烈攪拌 20～30 m in,離心除去沉淀 ,經(jīng)透析、 醇沉、 洗滌、 干燥 ,即得脫蛋白多糖。HCl法 :用 HCl調(diào)節(jié)粗多糖濃縮液至 pH = 3, 10～20℃ 靜置過夜 ,離心除去

13、沉淀液 ,再透析醇沉、 洗滌、 干燥 ,即得脫蛋白多糖。正丁醇 - 三氯乙酸法 :在粗多糖濃縮液中加入等體積的三氯乙酸 - 正丁醇試劑 ,振搖 10 m in,于分液漏斗中靜置分層 ,收集下層的水溶液 ,經(jīng)透析醇沉、 洗滌、 干燥 ,即得脫蛋白多糖。2. 5 板藍根多糖的純化 將一定量的脫蛋白多糖 ,用蒸餾水溶解后上樣 , 0. 15 mol·L- 1 NaCl進行洗脫 ,流速控制在 0. 3 m l·m in-

14、 1 ,洗脫液由分布收集器進行收集 ,苯酚 - 硫酸法跟蹤檢測 ,分別合并出峰的流出液 ,減壓濃縮至一定體積 ,醇沉、 過濾、 干燥 ,· 2 9 9 1 ·時珍國醫(yī)國藥 2009年第 20卷第 8期 L ISH IZHEN MED I CI NE AND MATER I A MED I CA RESEARCH 2009 VOL. 20 NO. 8表 3 4種脫蛋白方法的比較方法 去蛋白多糖得率( % )多糖含量(

15、% ) A280吸光值Sevagee 25. 83 86. 97 0. 170三氯乙酸法 43. 87 91. 46 0. 106HCl法 41. 41 79. 37 0. 252正丁醇 - 三氯乙酸法 33. 42 92. 10 0. 0953. 8. 2 葡聚糖凝膠 (Sephadex G - 100)柱層析純化分離 板藍根多糖 Sephadex G - 100柱層析純化分離的洗脫曲線如圖 6。出現(xiàn)4個洗脫峰 , 收集其中含量最高

16、所對應(yīng)的 5～7號管 , 透析 , 濃縮 , 加入 3倍體積 95%乙醇 , 離心分離 , 冷凍干燥 , 得到板藍根多糖。圖 6 板藍根多糖的洗脫曲線3. 9 純度鑒定 對 Sephadex G - 100層析柱上純化分離得到的 5～7管的板藍根多糖組分在 190～ 800 nm范圍進行掃描 ,結(jié)果見7～8。在 260 nm和 280 nm處無核酸和蛋白質(zhì)的特征吸收峰 ,說明產(chǎn)品中不含核酸和蛋白質(zhì)。經(jīng) Sephadex G - 10

17、0柱層析洗脫 ,所得的峰形狀為對稱的單一峰 ,表明純化后的板藍根多糖為分子大小均一的單一組分多糖。4 結(jié) 論利用水煮醇沉法從板藍根中提取水溶性多糖 , 通過單因素實驗和正交實驗對板藍根多糖的提取工藝進行優(yōu)化 , 確定的最佳提取條件為 : 液料比 30∶1,提取溫度 90℃,提取時間 6 h,板藍根粗多糖的得率為 25. 63% ,多糖含量達到 76. 42%。對脫蛋白方法進行了優(yōu)化 , 采用三氯乙酸法去蛋白的多糖得率 43. 87%

18、, 多糖含量 91. 46% , 脫蛋白效果好。圖 7 板藍根多糖的紫外可見光譜圖 8 板藍根多糖純度鑒定的洗脫曲線利用葡聚糖凝膠 Sephadex G - 100柱層析對板藍根粗多糖進行純化分離 , 收集主峰。純化后的板藍根多糖為單一組分多糖 , 不含核酸和蛋白質(zhì)。這為下一步對板藍根多糖的分離純化和結(jié)構(gòu)的分析奠定了基礎(chǔ)。參考文獻 :[ 1 ] 國家藥典委員會. 中國藥典 [ S]. 北京 :化學工業(yè)出版社 , 2005: 10.

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21、1105.[ 8 ] 劉 依. 板藍根有效成分的提取分離及含量測定 [D ]. 中國農(nóng)業(yè)大學 , 2002.( 歡迎您訂閱 (《 人力資源管理 》 雜志經(jīng)國家新聞出版總署正式批準 ,內(nèi)蒙古日報社主管 ,中國人事科學研究院、 北京大學人力資源開發(fā)與管理中心聯(lián)合支持。國際刊號 : ISS N1673 - 8209,國內(nèi)刊號 : CN15 - 1346 /F,郵發(fā)代號 : 16 - 293。是我國為數(shù)不多的人力資源部門、 企業(yè)高中層領(lǐng)導(dǎo)

22、、 教育科研管理和相關(guān)管理的學術(shù)期刊。學術(shù)刊辦刊宗旨 :本刊主要介紹、 探討和研究人力資源管理理論與實踐問題 ,推進人力資源管理的理論建設(shè)和實際應(yīng)用水平 ,加強教育科研管理 ,為我國人事制度改革和人力資源能力建設(shè)服務(wù)。學術(shù)刊主要欄目 :社科經(jīng)濟 :人力資源、 社科論壇、 經(jīng)濟發(fā)展、 科學管理、 金融研究、 財會審計等。教研管理 :教育教學、 高等教育、 職業(yè)教育、 基礎(chǔ)教育、 學術(shù)論壇、 圖書館論壇等?？茖W技術(shù) :科技論壇、 高新技術(shù)、

23、 工程技術(shù)、 IT技術(shù)、 信息科學、 醫(yī)藥研究等。城建研究 :城建與規(guī)劃、 建筑科學、 園林設(shè)計、 工程管理、 資源環(huán)境、 交通管理等。學術(shù)刊征稿對象 :人力資源部門工作人員 ;企事業(yè)單位中高級管理人員 ;相關(guān)科研、 高校教育機構(gòu)的理論工作者 ;人才交流、 管理咨詢機構(gòu)工作人員。學術(shù)刊投稿須知 :文章字數(shù)應(yīng)控制在 2800—5600字。 (本刊一版為 2800字左右 )。1文題 (20字以內(nèi) ,可帶副題 ) ; 2姓名 (可多人署名 )

24、 ; 3 (單位全稱 ,所在省、 市 ,郵政編碼 ) ; 4摘要 (100 - 200字 ,左頂格 ) ; 5關(guān)鍵詞 (3—5個 ,以“; ” 號隔開 ,左頂格 ) ; 6文題英譯 ;來稿兩周內(nèi)未接到回復(fù)者請速來函來電查詢 ;經(jīng)審核合格收到“ 錄用通知 ” 后滿 3個月仍未收到樣刊者 (僅限第一作者 ) ,請速來函來電查詢 ,不符合錄取條件的文章本刊不退稿件。聯(lián)系電話 : 01060896999 /60895999 編輯 :邱建霞

25、 手機 : 13146961719 郵箱 : cnki11@126. com通訊地址 :北京市西外大街 100044—123號信箱郵編 : 100044 本刊網(wǎng)址 : www . rlzyglzz . com中華人民共和國新聞出版總署 : http: / /www. gapp. gov . cn中國核心期刊 (遴選 )數(shù)據(jù)庫 : http: / / rlzygl . periodicals . net . cn· 4 9