芳香烴化合物的微生物降解及基因工程菌的構(gòu)建.pdf

1、該研究以苯酚為唯一的碳源和能源從農(nóng)藥廠活性污泥和煤氣廠污水排放口周圍的土壤中分離到三株降解能力較好的革蘭氏陰性的芳香烴降解菌,分別命名為ZD 2、ZD4-1和ZD 4-3.通過細(xì)菌的16S rDNA序列比對分析以及相關(guān)形態(tài)學(xué)和生理生化特性分析,將ZD 2、ZD4-1和ZD4-3三株菌分別鑒定屬于多食鞘氨醇桿菌(Sphingobacterium multivorum),睪丸酮叢毛單胞菌(Comamonas testosteroni)和銅綠

2、假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa).基于16S rDNA序列的系統(tǒng)分類研究表明,菌株ZD4-1和ZD4-3分別屬于兩個不同的分類亞組.研究了Sphingobacterium multivorum ZD 2對五氯酚(PCP)的共代謝降解.結(jié)果表明,苯酚作為生長底物對細(xì)菌的生長有一定的抑制作用,PCP共代謝降解效率低.以葡萄糖為生長底物時PCP降解效果更好,當(dāng)葡萄糖的量能夠滿足細(xì)菌的生長以及提供降解PCP所需的還原性物

3、質(zhì)的量時,則生長底物不再是PCP降解的限制性因素,繼續(xù)增加葡萄糖不能促進(jìn)PCP的降解,葡萄糖和PCP之間不存在底物的競爭性抑制現(xiàn)象.以菌株Comamonas testosteroni ZD4-1和Pseudomonas aeruginosa ZD4-3為材料,研究了它們對芳香烴化合物的降解機(jī)理.結(jié)果表明,ZD4-l和ZD4-3分別利用鄰苯二酚l,2-雙加氧酶催化的鄰裂途徑和鄰苯二酚2,3-雙加氧酶催化的間裂途徑降解苯酚.將fPg基因重組

4、到pUT mini-Tn5轉(zhuǎn)座子載體pUT-Hg中,構(gòu)建了一個fPg基因的轉(zhuǎn)基因載體pUT-Hg-fpg.利用雙親接合轉(zhuǎn)移技術(shù)將fPg基因插入到受體菌Comamonas testosteroni ZD4-1的染色體中,并篩選到一株轉(zhuǎn)基因工程菌Comamonas testosteroni ZD4-1-fpg.ZD4-1-fpg在熒光顯微鏡下受480 nm紫外光激發(fā)能夠發(fā)出綠色熒光,但是fpg基因中pheB基因表達(dá)的鄰苯二酚2,3一雙加氧酶