構(gòu)建降解有機(jī)氯化物基因工程菌研究.pdf

1、環(huán)氧丙烷生產(chǎn)廢水中含有較高濃度的有機(jī)氯化物，如氯丙醇、丙二醇、二氯異丙醚、氯丙酮等，是生化法處理的難點(diǎn)。本文以環(huán)氧丙烷生產(chǎn)廢水為出發(fā)點(diǎn)，主要研究以下三方面的內(nèi)容。首先，研究有機(jī)氯化物的生物降解機(jī)制。在生物學(xué)領(lǐng)域采用生物信息學(xué)方法對(duì)1，3-二氯-2-丙醇的生物降解機(jī)制進(jìn)行研究。獲取了1，3-二氯-2-丙醇降解途徑中的關(guān)鍵酶halohydrin epoxidase A（鹵代醇環(huán)氧酶A）和halohydrin epoxidase B（鹵代醇環(huán)

2、氧酶B）的相關(guān)信息、序列特性及DNA序列信息，并對(duì)其進(jìn)行了同源分析。由同源分析的結(jié)果可知，能夠合成這兩種關(guān)鍵酶的相關(guān)微生物在自然界中分布廣泛。其中，具有代表性的同源微生物有：棒狀桿菌屬（Coryne-bacterium sp.）、節(jié)細(xì)菌屬（Arthrobacter sp.）、伯克霍爾德氏菌（Burkholderia sp.）等。其次，選取鹽生桿菌J7，大腸桿菌DH5α和細(xì)菌WH-ZJ來研究三種微生物對(duì)環(huán)氧丙烷廢水的適應(yīng)性機(jī)制，結(jié)果表明細(xì)

3、菌對(duì)環(huán)氧丙烷廢水中有機(jī)物的降解能力才是限制細(xì)菌生長的主要因素之一；選取棒桿菌（Corynebacterium sp.）CICC 10189為試驗(yàn)菌株，通過對(duì)關(guān)鍵酶的活性鑒定實(shí)驗(yàn)，證明棒桿菌CICC 10189不能高效利用1，3-二氯-2-丙醇作為碳源，但該細(xì)菌中可能存在著能合成可降解1，3-二氯-2-丙醇的酶（鹵代醇環(huán)氧酶A或鹵代醇環(huán)氧酶B）的基因。最后，采用分子生物學(xué)手段對(duì)1，3-二氯-9-丙醇生物降解代謝途徑中的關(guān)鍵酶潛在目的基因進(jìn)

4、行克隆研究。利用PCR技術(shù)從棒桿菌（Corynebacterium sp.）CICC 10189基因組中擴(kuò)增出大小約為700bp的基因片段，將其連接到PHX303載體上構(gòu)建重組質(zhì)粒PHX303—hheB，并轉(zhuǎn)化至E．coli DH5α．篩選出四個(gè)陽性菌，雙酶切鑒定和PCR擴(kuò)增鑒定兩種鑒定結(jié)果存在矛盾，核苷酸序列測定及分析結(jié)果表明，克隆出的基因序列與GenBank中報(bào)道的伯克霍爾德氏菌（Burkholderia）的非潛在目的基因具有很高的