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1、本文探討了金屬螯合親和層析固定相制備的最佳條件:戊二醛濃度0.55%,氨三乙酸濃度0.40 mol/L,反應(yīng)時(shí)間10 h,反應(yīng)溫度65℃;鎳離子配體較鋅離子配體有更大的固載量;未加配基的載體對(duì)脲酶無(wú)特異性吸附。利用此固定相對(duì)大豆脲酶液進(jìn)行分離純化, Zn2+柱和Ni2+柱的酶回收率分別為88.5和80.4%,純化倍數(shù)分別為3.7和6.1。
用酶催化動(dòng)力學(xué)光度法測(cè)定底物及抑制劑含量,試驗(yàn)了各試劑的用量,以及溫度、pH值對(duì)酶催化反
2、應(yīng)的影響。研究了尿素濃度及抑制劑濃度與反應(yīng)速度的關(guān)系,確定線性范圍,并進(jìn)行了試樣測(cè)定。
用殼聚糖作為載體,戊二醛作交聯(lián)劑,對(duì)脲酶進(jìn)行固定化。最佳固定化條件為:聯(lián)酶時(shí)間90min,戊二醛濃度0.53%,緩沖液pH7.0。游離酶和固定化酶的最佳反應(yīng)溫度分別為33℃和70℃,最佳pH值均為7.0,表觀米氏常數(shù)分別為29.8mmol/L和13.9 mmol/L;在70℃存放2 h后,游離酶活力僅為最初值的6%,固定化酶活力則為最初值的
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