結(jié)締組織生長(zhǎng)因子在糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)人腎系膜細(xì)胞纖維結(jié)合蛋白表達(dá)中的作用.pdf

1、研究目的 1.觀察糖基化終產(chǎn)物(AGEs)對(duì)體外培養(yǎng)人腎系膜細(xì)胞的增殖、活性氧生成的變化以及結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)和纖維結(jié)合蛋白(FN)表達(dá)的影響，探討AGEs在糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展中的機(jī)制以及氨基胍對(duì)糖尿病腎病的防治作用。 2.探討重組人CTGF蛋白(rhCTGF)對(duì)人腎系膜細(xì)胞CTGF、FN表達(dá)的影響以及抗人CTGF中和抗體(anti-CTGFIgG)在AGEs誘導(dǎo)的人腎系膜細(xì)胞FN表達(dá)中的作用，揭示AGEs在

2、以細(xì)胞外基質(zhì)增生和纖維化為特征的糖尿病并發(fā)癥中的潛在作用機(jī)制。 研究方法 采用體外人腎系膜細(xì)胞珠培養(yǎng)方法，用葡萄糖和牛血清白蛋白模擬人體環(huán)境合成糖基化終產(chǎn)物(AGE-BSA)，然后分別用不同濃度的AGE-BSA、重組人CTGF蛋白、抗CTGF中和抗體以及氨基胍干預(yù)系膜細(xì)胞的條件下培養(yǎng)至各自設(shè)定的時(shí)間。四唑鹽比色試驗(yàn)(MTT)法測(cè)定細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，借助分光光度法檢測(cè)系膜細(xì)胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT

3、)活性和丙二醛(MDA)含量；半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法測(cè)定細(xì)胞CTGF和FN的mRNA水平；免疫細(xì)胞化學(xué)方法測(cè)定細(xì)胞的CTGF、FN蛋白含量以及用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)細(xì)胞上清液中FN的蛋白水平。 結(jié)果 1、一定條件下，AGEs呈濃度和時(shí)間依賴方式促進(jìn)系膜細(xì)胞的增殖，干預(yù)時(shí)間延長(zhǎng)反而抑制其生長(zhǎng)(P＜0.05)；2、細(xì)胞培養(yǎng)上清液MDA含量、SOD與CAT活性隨著AGEs干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)而

4、升高，AGEs可促進(jìn)系膜細(xì)胞MDA的生成，同時(shí)降低SOD與CAT的活性，(P＜0.05)；3、一定條件下，AGEs呈濃度和時(shí)間依賴方式增強(qiáng)系膜細(xì)胞CTGFmRNA和FNmRNA的表達(dá)(P＜0.05)，氨基胍可通過(guò)抑制AGEs的生成從而使制得的AGEs對(duì)系膜細(xì)胞CTGFmRNA和FNmRNA表達(dá)水平的影響部分地降低(P＜0.05)；4、重組人CTGF蛋白在一定條件下能增強(qiáng)系膜細(xì)胞CTGFmRNA和FNmRNA的表達(dá)(P＜0.05)；5、一

5、定條件下，抗人CTGF中和抗體可顯著抑制AGEs誘導(dǎo)的FN的表達(dá)，但不能完全阻斷這一效應(yīng)(P＜0.05)。 結(jié)論 1、AGEs可引起系膜細(xì)胞的增殖；促進(jìn)系膜細(xì)胞活性氧的生成，并降低抗氧化酶活性，加重系膜細(xì)胞的氧化負(fù)荷；2、AGEs可上調(diào)系膜細(xì)胞CTGF和FN的表達(dá)，并且，AGEs誘導(dǎo)系膜細(xì)胞FN的表達(dá)一定程度上是由AGEs誘導(dǎo)的CTGF所介導(dǎo)，這可能是AGEs致以細(xì)胞外基質(zhì)增生和纖維化為特征的糖尿病腎病的一個(gè)重要機(jī)制。氨