結(jié)締組織生長(zhǎng)因子、骨膜蛋白在iNSIP肺組織中的表達(dá).pdf

1、背景和目的:
　　特發(fā)性非特異性間質(zhì)性肺炎(idiopathicnonspecificinterstitialpneumonia，iNSIP)是一種具有特征性臨床-影像-病理表現(xiàn)、獨(dú)立的疾病，與其他特發(fā)性間質(zhì)性肺炎(idiopathicinterstitialpneumonias，IIPs)不同，歸類(lèi)于IIPs中慢性致纖維化型，與結(jié)締組織病、職業(yè)暴露等無(wú)關(guān)，目前發(fā)病機(jī)制不明。iNSIP分為富細(xì)胞為主型(cellularidiopa

2、thicnonspecificinterstitialpneumonia，c-iNSIP)和纖維化為主型（fibroticidiopathicnonspecificinterstitialpneumonia，f-iNSIP），病理學(xué)上表現(xiàn)為不同程度的肺間質(zhì)慢性炎癥、纖維化，不同視野病變時(shí)相基本一致，f-iNSIP預(yù)后較差。越來(lái)越多研究證實(shí)一些細(xì)胞因子在慢性纖維化疾病中起著重要作用，肺泡上皮細(xì)胞過(guò)度凋亡、成纖維細(xì)胞及炎性細(xì)胞增殖浸潤(rùn)參與i

3、NSIP的發(fā)病過(guò)程。結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connectivetissuegrowthfactor，CTGF)是一種富含半胱氨酸的多肽，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖、分化、細(xì)胞外基質(zhì)的合成是其主要的生物學(xué)活性;關(guān)于間質(zhì)性肺疾病的研究顯示，CTGF在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforminggrowthfactorβ1，TGF-β1）調(diào)節(jié)的纖維化進(jìn)程中起著關(guān)鍵的作用，與肺纖維化程度呈正相關(guān)，在特發(fā)性肺纖維化(idiopalhicpulmonaryfib

4、rosis，IPF)患者人肺組織中CTGFmRNA為陽(yáng)性表達(dá)。骨膜蛋白(periostin)屬成束蛋白(fasciclin)家族成員，分子量為90kD，國(guó)外研究表明骨膜蛋白可被成纖維細(xì)胞分泌，在f-iNSIP患者肺組織中的表達(dá)明顯增高。最近Uchida等對(duì)博來(lái)霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化模型進(jìn)行研究，結(jié)果顯示在肺纖維化的進(jìn)程中，骨膜蛋白在以中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞為主的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用。限于人體組織來(lái)源稀缺，國(guó)內(nèi)外關(guān)于CTGF、骨膜蛋白在

5、IIPs發(fā)病中作用的研究多以動(dòng)物模型為主，關(guān)于人類(lèi)iNSIP肺組織研究較少。病理分型是預(yù)測(cè)iNSIP預(yù)后最重要的指標(biāo)，患者DLCO、PaO2下降常預(yù)示f-iNSIP患者預(yù)后不良。
　　本實(shí)驗(yàn)采用c-iNSIP、f-iNSIP患者肺組織和正常肺組織標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象來(lái)研究，從而排除物種間的差異，旨在探討CTGF、CTGFmRNA、骨膜蛋白在c-iNSIP、f-iNSIP肺組織中的表達(dá)，并分析CTGF、CTGFmRNA、骨膜蛋白的表達(dá)與

6、肺活檢時(shí)患者DLCO、PaO2之間的關(guān)系。為深入了解iNSIP發(fā)生發(fā)展尋找分子生物學(xué)依據(jù)，并尋找預(yù)測(cè)iNSIP預(yù)后的指標(biāo)。
　　材料與方法:
　　1.對(duì)象:實(shí)驗(yàn)組c-iNSIP患者（8例）和f-iNSIP患者（10例），均來(lái)自在河南省人民醫(yī)院住院患者開(kāi)胸活檢肺標(biāo)本，最終診斷均由呼吸科醫(yī)生會(huì)同病理科和影像科醫(yī)生共同完成?；颊唛_(kāi)胸活檢前已行客觀檢查并均未采用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑治療，已排除粉塵、動(dòng)物蛋白等導(dǎo)致過(guò)敏性肺泡炎物質(zhì)接

7、觸史者、患有自身免疫性疾病的患者。對(duì)照組10例為因肺內(nèi)孤立癌結(jié)節(jié)在河南省人民醫(yī)院行肺葉切除術(shù)的住院患者，病理診斷為正常肺組織后選入(所取組織距癌腫≥5cm)。
　　2.方法:(1)HE染色:觀察肺組織變化。(2)CTGF、骨膜蛋白免疫組化檢測(cè):每次染色均設(shè)空白對(duì)照(PBS)和陽(yáng)性對(duì)照，顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞。(3)CTGFmRNA原位雜交檢測(cè):空白對(duì)照用預(yù)雜交液代替雜交液進(jìn)行，顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)。(4)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS17

8、.0軟件，表達(dá)的組間比較用Kruskal-Wallis或Mann-WhitneyU檢驗(yàn),相關(guān)分析采用Spearman檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.c-iNSIP組和f-iNSIP組CTGF在肺泡上皮細(xì)胞中的表達(dá)均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為U=17.50，P＜0.05;U=11.00，P＜0.05）。
　　2.c-iNSIP組和f-iNSIP組CTGF

9、mRNA在肺泡上皮細(xì)胞中的表達(dá)均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為U=8.00，P＜0.05;U=15.00，P＜0.05）。
　　3.c-iNSIP組和f-iNSIP組CTGF或CTGFmRNA在肺泡上皮細(xì)胞中的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為U=25.50，P＞0.05;U=37.00，P＞0.05）。
　　4.c-iNSIP組和f-iNSIP組、c-iNSIP組和對(duì)照組骨膜蛋白在肺間質(zhì)成纖維細(xì)胞上的表達(dá)未見(jiàn)明顯異常

10、，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為U=28.00，P＞0.05;U=28.50，P＞0.05)。
　　5.f-iNSIP組骨膜蛋白在肺間質(zhì)成纖維細(xì)胞上的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（U=23，P＜0.05）。
　　6.f-iNSIP組患者肺組織中CTGF、CTGFmRNA、骨膜蛋白的表達(dá)與PaO2、DLCO均成負(fù)相關(guān)，P均＜0.05。
　　7.c-iNSIP組患者肺組織中CTGF、CTGFmRNA、骨膜蛋白的表達(dá)與Pa