天麻的RAPD條件優(yōu)化及貴州產(chǎn)天麻的RAPD分析.pdf

1、目的:建立天麻基因組DNA的提取方法、天麻RAPD分析的優(yōu)化條件,對貴州產(chǎn)天麻進(jìn)行RAPD分析.方法:(1)用CTAB法結(jié)合酚/氯仿法加以改良提取天麻基因組DNA(2)根據(jù)文獻(xiàn)參考條件,改變Mg<'2+>、dNTPs、DNA模板、TaqDNA聚合酶濃度建立天麻RAPD分析的優(yōu)化條件;(3)根據(jù)優(yōu)化的天麻RAPD分析條件用個隨機(jī)引物對天麻進(jìn)行RAPD分析.結(jié)果:(1)提取的天麻基因組DNA純度高(A<,260>/A<,280>>1.8),

2、耗時短(2~3h),分子大小為50kb,使用于RAPD分析.(2)當(dāng)反應(yīng)液中含模板DNA量為100ng,3.0 mmol/L Mg<'2+>,0.2mmol/L dNTPs,1U TaqDNA聚合酶,0.2μmol/L引物時,RAPD分析效果佳.(3)擴(kuò)增條帶可作為鑒定野生型天麻DNA和人工種植天麻DNA以S60為引物的擴(kuò)增條帶有差異;天麻的地源距離較遠(yuǎn)時,相似系數(shù)較小,親緣關(guān)系較遠(yuǎn).結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)所用的改進(jìn)法提取的天麻基因組DNA質(zhì)量高