臺(tái)灣蟲草單次生子囊孢子菌株交配型基因的初步研究.pdf_第1頁(yè)
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1、臺(tái)灣蟲草(OphiocordycepsformosanaKobayasi&Shimizu)其無(wú)性型為黃山被毛孢(Hirsutellahuangshanensis)。本文首次對(duì)臺(tái)灣蟲草無(wú)性型菌株的交配型基因進(jìn)行了較為系統(tǒng)地研究,主要內(nèi)容包括:采用稀釋涂布平板法和顯微定位法獲得臺(tái)灣蟲草的單次生子囊孢子,并對(duì)次生子囊孢子的萌發(fā)與生長(zhǎng)過程進(jìn)行觀察記錄;利用譚琦等人設(shè)計(jì)的引物對(duì)分離所得到的34株單次生子囊孢子菌株的交配型基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增,測(cè)序,

2、再對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì)和分析,建立系統(tǒng)發(fā)育樹進(jìn)行遺傳多樣性分析和聚類分析;對(duì)含有不同交配型基因的單次生子囊孢子菌株分別進(jìn)行PPDA平板培養(yǎng),SDY液體培養(yǎng)和蟲草專用培養(yǎng)基子實(shí)體誘導(dǎo)培養(yǎng),以探究不同交配型類型菌株生長(zhǎng)狀態(tài)的差異,并且希望能分析出臺(tái)灣蟲草的交配型類型。
  臺(tái)灣蟲草次生子囊孢子分離試驗(yàn)結(jié)果表明:在25℃培養(yǎng)3~7天后,大部分次生子囊孢子開始萌發(fā),一端膨大伸長(zhǎng),另一端稍微萎縮,長(zhǎng)度約7~12μm。之后一端繼續(xù)緩慢伸長(zhǎng),14

3、天左右孢子長(zhǎng)度大約為72.36~162.59μm。40天左右肉眼可見微菌落,呈灰白色,產(chǎn)生分生孢子,2~6個(gè)聚集成團(tuán),外被粘液層,分生孢子單孢、無(wú)色、光滑、柱狀,大小約為7×2.5μm。微觀形態(tài)鑒定表明為典型的黃山被毛孢。
  臺(tái)灣蟲草單次生子囊孢子菌株交配型基因研究結(jié)果表明:34株單次生子囊孢子菌株中14個(gè)菌株只含有MAT1-1基因;4個(gè)菌株只含有MAT1-2基因;剩下的16個(gè)菌株兩種基因都具有。將測(cè)序結(jié)果在GenBank上比對(duì)

4、發(fā)現(xiàn)供試菌株的MAT1-1基因與蛹蟲草的MAT1-1-1基因較為相似;供試菌株的MAT1-2基因與蛹蟲草的MAT1-2-1基因較為相似。此外,黃山被毛孢的交配型基因MAT1-1,對(duì)于不同的單孢菌株有一定的區(qū)分度;而不同單孢菌株的MAT1-2基因卻高度相似,無(wú)法反映出遺傳多樣性。這兩種交配型基因均可以用作建立系統(tǒng)發(fā)育樹,并且能很明顯地將實(shí)驗(yàn)菌株與GenBank中親緣關(guān)系近的菌株聚集在一起。
  不同交配型基因菌株生長(zhǎng)狀態(tài)差異試驗(yàn)結(jié)果

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