油菜菌核病菌子囊盤和子囊孢子室內(nèi)誘導(dǎo)方法研究.pdf

1、油菜菌核病菌通過菌核在適宜環(huán)境中萌發(fā)產(chǎn)生子囊盤并向外彈射子囊孢子來進行病害的傳播擴散及侵染。獲得足夠的菌核病子囊孢子是深入研究核盤菌致病機理及篩選抗菌核病的油菜品種的一個極其重要的技術(shù)環(huán)節(jié)，自然條件中獲取子囊孢子較為費時費力，因此需要研究菌核病菌的室內(nèi)誘導(dǎo)萌發(fā)。已知的室內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)孢方法有多種，但是根據(jù)這些實驗方法做出的結(jié)果與預(yù)期結(jié)果差別較大，萌發(fā)率較低，且不產(chǎn)生子囊盤，其中一些實驗方法實施起來更是比較費時費力。本論文通過對比研究前人的方法

2、,對油菜菌核病菌的菌核培育、菌核萌發(fā)、子囊孢子誘導(dǎo)收集進行了試驗研究，旨在探索和建立一套誘導(dǎo)油菜菌核病菌有性孢子產(chǎn)生的實用有效的實驗方法，主要結(jié)果如下：
　　1不同培養(yǎng)基對菌核大小、質(zhì)地、數(shù)量及后續(xù)萌發(fā)影響
　　本實驗利用小麥、土豆、向日葵花盤、PDA等4種培養(yǎng)基來培育油菜菌核病菌，以期獲得大量人工培育菌核。土豆作為培養(yǎng)基培育出的菌核多為不規(guī)則或長橢圓形，平均單粒菌核大小能達到1.02×0.39cm，質(zhì)地飽滿，數(shù)量多（每三角

3、瓶能培育出600粒左右菌核），并且只有土豆培養(yǎng)基培育出的菌核能夠順利萌發(fā)產(chǎn)生子囊盤。PDA培養(yǎng)基培育出的菌核產(chǎn)量低（每皿約37粒），多為圓形或扁圓形上被菌絲，并且多數(shù)菌核不成熟，易碎裂，其培育出的菌核也是最小的（平均為0.45×0.16cm），在后續(xù)萌發(fā)實驗中，其菌核無法萌發(fā)產(chǎn)生子囊柄，只會長出菌絲。小麥培養(yǎng)基培育出的菌核介于上述兩者之間，圓形居多，多數(shù)菌核生長成熟，平均大小為0.72×0.28cm,其菌核只能萌發(fā)出子囊柄，并不能產(chǎn)生子

4、囊盤，為無效萌發(fā)。向日葵花盤接種困難，且被雜菌污染，無菌核產(chǎn)生。
　　2不同保濕材料對菌核4℃低溫保濕誘導(dǎo)萌發(fā)率的影響
　　本實驗中所采用的實驗菌株不經(jīng)過4℃低溫保濕誘導(dǎo)無法萌發(fā)產(chǎn)生子囊柄只會長出菌絲。本文用蛭石、石英砂、珍珠巖、滅菌土和棉花等5種具有保濕功能的材料對菌核進行低溫保濕誘導(dǎo)處理，處理2個月。蛭石和珍珠巖對菌核的保濕效果一般，誘導(dǎo)期間菌核不會萌發(fā)產(chǎn)生子囊柄，并且容易長出菌絲。利用滅菌土對菌核低溫保濕誘導(dǎo)期間，其內(nèi)

5、部易滋生雜菌，導(dǎo)致菌核腐爛，無菌核萌發(fā)出子囊柄并有大量菌絲生成。加水后的石英砂透氣性能較低，只有部分菌核萌發(fā)產(chǎn)子囊柄，萌發(fā)率約53％。棉花鎖水性能較好，容易滅菌，且透氣性良好，在低溫誘導(dǎo)期間，菌核極易萌發(fā)產(chǎn)生子囊柄，且萌發(fā)率高達95%。低溫誘導(dǎo)期間的萌發(fā)均為無效萌發(fā)，只產(chǎn)生子囊柄不生成子囊盤，但低溫誘導(dǎo)期間不產(chǎn)生子囊柄的菌核后期18℃常溫誘導(dǎo)下也不會萌發(fā)產(chǎn)生子囊盤。
　　3不同保濕材料對菌核18℃常溫下保濕誘導(dǎo)萌發(fā)率的影響

6、　　本實驗中利用棉花、蛭石、珍珠巖、滅菌土和濾紙等5種保濕材料對結(jié)束低溫誘導(dǎo)的菌核進行18℃常溫下保濕誘導(dǎo)萌發(fā)，并置于光照強度略大于500Lux的環(huán)境中培養(yǎng)。利用濾紙、蛭石和珍珠巖這3種保濕材料保濕的菌核萌發(fā)結(jié)果相似，菌核只會萌發(fā)出子囊柄，并于3-5d后逐漸枯萎，無法產(chǎn)生子囊盤為無效萌發(fā)。滅菌土保濕的菌核在誘導(dǎo)萌發(fā)期間多數(shù)被雜菌污染腐爛，并生成大量菌絲，無子囊柄生成。同低溫誘導(dǎo)時一樣，棉花保濕性能最好，利用棉花保濕的菌核其平均有效萌發(fā)率

7、達59%。
　　4不同方法收集的子囊孢子數(shù)量及干燥性比較
　　本實驗采用子囊孢子的自然彈射、水洗法和真空抽氣法等3種方法收集子囊孢子，結(jié)果表明，此3種收集方法都能采集到帶有活性的子囊孢子。水洗法收集到的單位面積（0.01mm2）內(nèi)平均孢子數(shù)目最多（21個），但是收集到的子囊孢子遇水后易萌發(fā)不便于保存。真空抽氣法收集到的單位面積（0.01mm2）內(nèi)平均孢子數(shù)目約為12個，僅次于水洗法，其孢子較為干燥，易于保存。自然彈射法收集到

8、的數(shù)量最少單位面積（0.01mm2）內(nèi)平均約為2個，干燥性一般次于真空抽氣法。
　　5子囊盤和子囊孢子室內(nèi)誘導(dǎo)方法的建立
　　根據(jù)上述實驗結(jié)果，建立了一套誘導(dǎo)油菜菌核病菌有性孢子產(chǎn)生的實用有效的實驗方法：利用土豆培養(yǎng)基培育接種純凈菌株于20℃光照下培育大量菌核，并選用棉花作為保濕材料對菌核進行4℃低溫黑暗誘導(dǎo)，處理2月。結(jié)束低溫誘導(dǎo)后再利用棉花對菌核保濕并于18℃略大于500Lux的光照環(huán)境中保濕萌發(fā)，最后采取真空抽氣法收集