油菜菌核病菌中的新病毒及其特性研究.pdf

1、真菌病毒是寄生真菌的病毒，其中一些病毒可以引起植物病原真菌致病力的衰退，具有控制作物病害的潛力。引起菌核病的核盤菌在自然界中廣泛存在，可感染450多種或亞種植物。在此研究之前，實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)從核盤菌中發(fā)現(xiàn)了一些對(duì)核盤菌具有顯著影響的真菌病毒，它們顯著地降低了致病性。從中國(guó)湖北省、江西省和安徽省等地方分離獲得了2000株核盤菌菌株，獲得了173株生長(zhǎng)異常菌以期從中篩選新的真菌病毒。分別從173個(gè)菌株中提取獲得了總RNA并等量混勻，之后對(duì)總RN

2、A樣品進(jìn)行了RNA_Seq分析。經(jīng)過(guò)拼接，獲得了247個(gè)具有顯著病毒序列特性的contig，這些contig預(yù)示測(cè)定的173個(gè)菌株中存在多種多樣的真菌病毒。對(duì)contig所推定編碼的蛋白序列在NCBI數(shù)據(jù)中進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)247個(gè)contig可能代表了48種真菌病毒，其中35種ssRNA(+)病毒，7種ssRNA(-)病毒，5種dsRNA病毒和1種ssDNA病毒，其中線粒體病毒是主要類型。
　　對(duì)四個(gè)Contig(contig3，c

3、ontig50，contig71和contig1178)所代表的新RNA病毒進(jìn)行了確認(rèn)，其中contig3和contig50代表的為負(fù)鏈RNA病毒，contig3所代表的病毒命名為Sclerotinia sclerotiorum bunya-like virus1(SsB1V1)，隸屬于Bunyaviridae科;contig50所代表的病毒命名為Sclerotinia sclerotiorum negative-stranded RN

4、A virus9(SsNsRV9)，與一些分類地位待定的病毒具有較近的親緣關(guān)系。contig71和contig1178代表的為新的(+)ssRNA病毒，均為Tymovirales目的病毒，分別命名為Sclerotinia sclerotiorum mycotymovirus1(SsMTV1)和Sclerotiniasclerotiorum deltaflexivirus2(SsDFV2)。
　　對(duì)SsDFV2進(jìn)行了詳細(xì)的研究，發(fā)現(xiàn)

5、該病毒與Botrytis porri RNA virus1(BpRV1)共同侵染低毒菌株228。228菌株在PDA上生長(zhǎng)緩慢，產(chǎn)生菌核少，而且產(chǎn)生時(shí)間延遲，幾乎不能誘導(dǎo)油菜差生病斑。建立在Contig序列的基礎(chǔ)上采用5'-和3'-RACE等對(duì)SsDFV2的基因組進(jìn)行了全長(zhǎng)測(cè)定。發(fā)現(xiàn)SsDFV2的基因組全長(zhǎng)為6711nt，含有Poly(A)尾。SsDFV2的基因組只含有一個(gè)推定的大開(kāi)放閱讀框架，編碼一個(gè)假定的病毒RNA復(fù)制酶，包括典型的甲

6、基轉(zhuǎn)移酶、RNA解旋酶和RdRp等三個(gè)功能域。SsDFV2與核盤菌上的另外一種病毒
　　Sclerotinia sclerotiorum deltaflexivirus1(SsDFV1)具有較高的同源性，復(fù)制酶中氨基酸相同性達(dá)到446/1185(38％)，相似性達(dá)到625/1185(52％)。它們?cè)谙到y(tǒng)上聚為一支，同屬于擬建立的Deltaflexiviridae科。SsDFV1的基因組編碼4推定的蛋白，而SsDFV2的基因只編碼R

7、NA復(fù)制酶，推定SsDFV2在核盤菌中可能丟失了其它的基因。
　　營(yíng)養(yǎng)體不親和性反應(yīng)嚴(yán)重限制了真菌病毒在寄主真菌間的擴(kuò)散，嚴(yán)重制約了真菌病毒防治病害的效果。我們研究發(fā)現(xiàn)SsDFV2具有強(qiáng)的侵染能力，將菌株228與其營(yíng)養(yǎng)體不親和的菌株Ep-1PNA367和菌株1980進(jìn)行對(duì)峙培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)病毒SsDFV2可以擴(kuò)散到這兩個(gè)菌株的菌落之中，而與SsDFV2共同感染菌株228的BpRV1卻沒(méi)有這種擴(kuò)散能力。進(jìn)一步將感染SsDFV2的Ep-1P