花鱸生長代謝相關(guān)基因克隆與鹽度調(diào)控生理機制.pdf

1、本研究對花鱸生長代謝相關(guān)的六個基因(GHR1、GHR2、TRαA、TRα、TRβ、LeptinA)進行了全長克隆及相關(guān)基因鹽度調(diào)控表達(dá)分析，并探究了鹽度調(diào)控后花鱸血液生理生化組成的變化情況。
　　1.花鱸生長代謝相關(guān)基因克隆
　　生長激素受體(GHR)作為GH/IGF軸的中心環(huán)節(jié)，在內(nèi)分泌調(diào)控中發(fā)揮重要作用。本實驗采用cDNA末端快速擴增法(RACE)技術(shù)克隆出花鱸GHR1和GHR2的cDNA全長序列:GHR1 cDNA全長

2、序列2436bp，編碼637個氨基酸;GHR2cDNA全長序列2940bp，編碼582個氨基酸。GHR1與GHR2由信號肽、胞外區(qū)、跨膜區(qū)、胞內(nèi)區(qū)組成，且結(jié)構(gòu)存在差異。
　　甲狀腺激素受體TR介導(dǎo)甲狀腺激素，調(diào)控機體生長、發(fā)育及代謝。用RACE技術(shù)克隆出花鱸TRαA、TRα和TRβ的cDNA全長序列:花鱸TRαA cDNA全長序列1851bp，編碼416個氨基酸;TRαB cDNA全長序列2370bp，編碼409個氨基酸;TRβ

3、cDNA全長序列3343bp，編碼395個氨基酸。
　　瘦素leptin在攝食、生長、生殖、免疫、能量平衡等多方面有重要作用。本實驗采用RACE技術(shù)克隆出花鱸LepA cDNA全長序列。結(jié)果表明:LepA cDNA全長序列為643bp，其中開放閱讀框483bp，編碼161個氨基酸。其氨基酸序列由信號肽和A、B、C、D四個α螺旋區(qū)域組成?；|LepA氨基酸序列與其他物種同源性較低，但三級結(jié)構(gòu)較為保守。
　　2.花鱸生長代謝相關(guān)

4、基因空間表達(dá)及鹽度調(diào)控表達(dá)分析
　　腦、腎、鰓中GHR1表達(dá)明顯高于GHR2;而在肌肉、垂體、肝臟、盲腸、胸腺、心臟中，GHR2表達(dá)明顯高于GHR1。推測，花鱸GHR2可能為SL受體。與TRαB和TRβ相比，各組織中TRαA表達(dá)量明顯較低。TRαA主要在肝臟、腦、心臟中表達(dá)。TRαB在垂體中表達(dá)量最高，其次是腦、腎臟、心臟、肝臟等。TRβ在腦中表達(dá)量最高，垂體表達(dá)量次之。TRαB和TRβ在垂體和腦中普遍表達(dá)較高。花鱸TRαB與TR

5、β可能共同參與TH對TSH的負(fù)反饋調(diào)控過程?；|LepA主要在肝臟中表達(dá)，其次為腦。
　　急性低鹽度調(diào)控實驗設(shè)為海水組、半咸水組和淡水組。測定了急性低鹽度調(diào)控1d、2d、4d、6d、8d后，肝臟中GHRs、IGF1、LepA，垂體中GH，鰓和腎臟中TRs、PRLR表達(dá)水平。1d時，各組GHR1表達(dá)不變，GHR2、GH、IGF-I顯著下降。之后，相對于海水組，淡水組和半咸水組GHRs和IGF-1表達(dá)升高，而GH下降，GH與GHR負(fù)相

6、關(guān)。據(jù)結(jié)果推測，GH/IGF軸參與低滲調(diào)控可能是通過增加GHRs，進而激活下游IGF-1表達(dá)而實現(xiàn)?；|腎臟和鰓中TRs各亞型隨鹽度變化存在一定差異，推測TRαB可能為TR介導(dǎo)TH參與滲透調(diào)節(jié)的主要TRs亞型。2d時，半咸水組、淡水組間LepAmRNA無顯著性差異，但都顯著低于海水組，分別降至為海水組的33.38％和26.86％。結(jié)果表明，急性低鹽度調(diào)控可降低花鱸LepA轉(zhuǎn)錄水平。在2-8d時淡水組花鱸鰓和腎臟中PRLR轉(zhuǎn)錄水平逐漸高于

7、海水組和淡水組，且差異顯著。結(jié)果表明，PRLR在花鱸淡水適應(yīng)中發(fā)揮重要作用。
　　3.鹽度調(diào)控對花鱸血液生理指標(biāo)的影響及分子機制
　　本實驗探究了鹽度調(diào)控對花鱸血液生理指標(biāo)影響。結(jié)果表明，淡水組紅細(xì)胞和血紅蛋白含量均逐漸高于海水組和半咸水組，可能由于低滲脅迫使得淡水組花鱸代謝水平升高，對氧氣需求增加，進而提高自身紅細(xì)胞和血紅蛋白數(shù)量，保證代謝需求。海水組和淡水組花鱸血糖含量逐漸高于半咸水組。血清蛋白和臘類的研究結(jié)果較為類似，