過(guò)敏原Fagt1低變應(yīng)原分子的構(gòu)建及重組研究.pdf

1、苦蕎作為一種藥食同源的作物，具有很好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健作用。但是有報(bào)道苦蕎可能引起過(guò)敏癥狀，如哮喘、皮炎等，而苦蕎種子中的儲(chǔ)藏蛋白被鑒定為苦蕎主要過(guò)敏原。該蛋白屬于Cupin家族的11S球蛋白，在苦蕎種子中含量豐富，穩(wěn)定性好。本文主要從基因工程角度和食品加工角度對(duì)苦蕎過(guò)敏原進(jìn)行了研究。
　　本文首先采用基因重組技術(shù)對(duì)苦蕎過(guò)敏原Fagt1的核苷酸序列進(jìn)行了重新構(gòu)建，并將重組分子在原核載體中表達(dá)獲得幾種重組蛋白，分別命名為Fagt1-r

2、s1，F(xiàn)agt1-rs2，和Fagt1-rs3。這些重組蛋白由于失去天然蛋白特殊的結(jié)構(gòu)而喪失了IgE結(jié)合活性，因而免疫活性顯著降低。相比天然Fagt1，重組分子免疫活性降低了約90％，這些低敏分子有希望成為過(guò)敏特異性免疫治療的疫苗。同時(shí)，解聚狀態(tài)的Fagt1重組分子抗蛋白酶活性也明顯下降。這些結(jié)果說(shuō)明，11S種子儲(chǔ)藏蛋白的抗酶解穩(wěn)定性和免疫活性都依賴于其空間結(jié)構(gòu)的完整性，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)改造Cupin食物過(guò)敏原的天然構(gòu)象是降低其變應(yīng)原性的有效策

3、略。其次，就食品加工過(guò)程對(duì)苦蕎過(guò)敏原免疫活性的影響進(jìn)行了研究。通過(guò)提取苦蕎自身的多糖，研究在多糖成分存在下，過(guò)敏蛋白發(fā)生的美拉德反應(yīng)。結(jié)果表明，在70℃，3d條件下過(guò)敏蛋白與糖自發(fā)美拉德共價(jià)連接后，糖化蛋白在許多性質(zhì)諸如，電泳性質(zhì)，二級(jí)結(jié)構(gòu)，溶解度及穩(wěn)定性等都發(fā)生了改變。同時(shí)通過(guò)ELISA和免疫點(diǎn)雜交，使用患者血清和兔多抗對(duì)其免疫活性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示糖化蛋白IgE和IgG結(jié)合活性相比天然蛋白明顯降低。我們推測(cè)過(guò)敏原與糖分子的結(jié)合改變了