嘴壺夜蛾觸角轉(zhuǎn)錄組測序及嗅覺基因分析.pdf

1、目的:
　　昆蟲在進(jìn)化過程中形成了的一套非常精密的化學(xué)感受系統(tǒng)，能夠精確地接收外界的化學(xué)氣味，進(jìn)而調(diào)控昆蟲的各類生命活動，在昆蟲的體內(nèi)多種蛋白通過對外界氣味物質(zhì)識別，這個調(diào)控過程中主要發(fā)生在觸角當(dāng)中。嘴壺夜蛾作為吸果夜蛾的一類是一種重要的果實害蟲，在其生命周期中存在寄主轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象。目前我們對嘴壺夜蛾的認(rèn)識尚不夠全面，由于并非模式生物，在NCBI登陸的信息量滿足不了對其嗅覺識別機(jī)制的研究。因此本研究通過嘴壺夜蛾觸角進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測序，

2、并通過生物信息學(xué)和分子生物學(xué)的方法對篩選出來的嗅覺相關(guān)蛋白進(jìn)行初步研究，為深入研究嘴壺夜蛾化學(xué)感受機(jī)制，嗅覺相關(guān)蛋白的功能以及開發(fā)新型防治技術(shù)奠定了基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.通過轉(zhuǎn)錄組測序，分析嘴壺夜蛾的核苷酸和蛋白序列，并從中篩選嗅覺相關(guān)蛋白;
　　2.利用Clustalx對嘴壺夜蛾嗅覺相關(guān)基因同其他物種進(jìn)行序列比對，并用MEGA6.0構(gòu)建進(jìn)化樹進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析
　　3.運(yùn)用qPCR技術(shù)對嘴壺夜蛾嗅覺相關(guān)蛋白

3、在雌雄蟲各個生理狀態(tài)間的表達(dá)譜進(jìn)行檢測與分析。
　　結(jié)果和結(jié)論:
　　通過華大基因公司對首次對嘴壺夜蛾觸角進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，統(tǒng)計共組裝獲得2202660個Contig，42992個Unigene，運(yùn)用Blastx比對蛋白數(shù)據(jù)庫NR對獲得的所有Unigene進(jìn)行功能注釋。共得到了41個OBP候選基因，35個OR候選基因，20個CSP候選基因，7個IR候選基因和2個SNMP候選基因，其中包括8個特異的信息素嗅覺受體，超過一半得到了

4、完整的開放閱讀框。系統(tǒng)進(jìn)化分析中發(fā)現(xiàn)，有36個嘴壺夜蛾基因未找到其他昆蟲的同源基因，其中包括5個特異信息素受體，和8個吸果夜蛾氣味受體，其他基因都能找到同源基因，這為我們下一步研究蛋白功能打好了基礎(chǔ)。
　　雌性嘴壺夜蛾受取食影響的嗅覺相關(guān)基因，5個OR基因(OR4，OR13，OR25,OR28,OR29),7個OBP基因(OBP5,OBP7,OBP9,OBP10,OBP15,OBP21,OBP22,OBP27,OBP29,OBP3

5、4,GOBP1),7個CSP基因(CSP1-3,CSP7,CSP11,CSP13，CSP15)，2個IR基因(IR25a，IR76b)。
　　雄性嘴壺夜蛾受取食影響的嗅覺相關(guān)基因，三個OR基因(OR17-19)，5個OBP基因OBP20，OBP24，OBP26，OBP28，GOBP2)，5個CS基因(CSP1，CSP6-9)2個IR基因(IR25a，IR76b)和SNMP1。
　　雌性嘴壺夜蛾受交配影響的嗅覺相關(guān)基因，5個O

6、R基因(OR15,OR18,OR27,OR30,ORco),14個OBP基因(OBP6,OBP7,OBP9,OBP11,OBP13,OBP15,OBP17,OBP21,OBP27,OBP34,ABPX,GOBP1,PBP1,PBP2),11個CSP基因(CSP2,CSP3,CSP5,CSP7,CSP8,11-14,CSP18,CSP20)，四個IR基因(IR8a,IR21a,IR25a,IR76b)。
　　雄性嘴壺夜蛾受交配影響的

7、嗅覺相關(guān)基因，14個OR基因(OR3,OR4,OR6-8,18-20,OR22,OR25,OR29,OR30,OR32,ORco),3個OR基因(OR18,OR22,OR29),14個OBP基因(OBP3,OBP6,OBP7,OBP9,OBP10,OBP13,OBP15,OBP17,OBP21,OBP24,OBP27-29,PBP2),6個CSP基因(CSP1,CSP2,CSP11,CSP13,CSP14,CSP20)，IR76b和SN