山羊半月板脫細(xì)胞基質(zhì)支架的制備及擴(kuò)大孔徑方法的研究.pdf

1、半月板對(duì)于維持膝關(guān)節(jié)的生理功能是很重要的，半月板損傷與膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎(OA)的發(fā)生密切相關(guān)。由于半月板的自我修復(fù)能力有限，半月板部分或全部切除是治療半月板損傷的常用手段。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，組織工程對(duì)損傷半月板缺損的再生修復(fù)帶來了希望，而找尋合適的半月板支架在半月板組織工程中起著至關(guān)重要的作用。脫細(xì)胞半月板支架不僅具有良好的三維結(jié)構(gòu)、生物相容性和生物力學(xué)性能。本文旨在研究山羊半月板脫細(xì)胞基質(zhì)支架的制備方法、觀察它們的形態(tài)結(jié)構(gòu)、測(cè)定其生物力學(xué)

2、性能，并且進(jìn)一步研究擴(kuò)大支架孔徑地方法，為構(gòu)建組織工程半月板研究打下基礎(chǔ)。
　　方法:
　　取淘汰山羊半月板，采用不同脫細(xì)胞方法進(jìn)行山羊半月板脫細(xì)胞基質(zhì)支架的制備。方法一:采用高滲-低滲反復(fù)凍融、Tris-HCl溶液聯(lián)合胰蛋白酶溶液進(jìn)行半月板基質(zhì)的脫細(xì)胞處理;方法二:用高滲-低滲反復(fù)凍融、雙氧水和胰蛋白酶溶液輪流浸泡后，再用化學(xué)去垢劑TrionⅩ-100溶液和脫氧膽酸鈉溶液交替使用進(jìn)行半月板基質(zhì)的脫細(xì)胞處理。組織學(xué)觀察:用H

3、E染色、天狼猩紅染色、甲苯胺藍(lán)染色、番紅O染色和番紅-固綠染色方法對(duì)兩種不同方法制備的脫細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行組織學(xué)檢測(cè)，并將無細(xì)胞殘留組與天然半月板進(jìn)行掃描電鏡觀察和生物力學(xué)測(cè)定。最后分別用甲酸、Ⅰ型膠原酶、胰蛋白酶+Ⅰ型膠原酶對(duì)制備好的山羊半月板脫細(xì)胞基質(zhì)支架用進(jìn)行處理，在掃描電鏡下觀察并進(jìn)行生物力學(xué)測(cè)定。
　　結(jié)果:
　　方法一制備的脫細(xì)胞支架組織學(xué)觀察有細(xì)胞殘留，方法二制備的脫細(xì)胞支架組織學(xué)檢測(cè)無任何細(xì)胞殘留，基質(zhì)中保存了大量

4、的膠原纖維。掃描電鏡結(jié)果顯示脫細(xì)胞支架組的孔徑和孔隙率比天然半月板略大，生物力學(xué)性能上二者無顯著性差異。擴(kuò)大孔徑研究結(jié)果顯示:甲酸組、Ⅰ型膠原酶組和胰蛋白酶+Ⅰ型膠原酶組的孔徑和孔隙率較脫細(xì)胞基質(zhì)支架的大，生物力學(xué)測(cè)定顯示甲酸組、Ⅰ型膠原酶組和胰蛋白酶+Ⅰ型膠原酶組與脫細(xì)胞基質(zhì)支架組均存在顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　1.用蒸餾水-10％NaCl溶液反復(fù)凍融、0.1％雙氧水和0.5％的胰蛋白酶輪流浸泡后，再用化學(xué)去垢劑Tri