毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)生物活性物質(zhì).pdf

1、第一章,首先對(duì)毛細(xì)管電泳技術(shù)的發(fā)展及現(xiàn)狀進(jìn)行了簡(jiǎn)單的介紹,然后對(duì)毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用進(jìn)行了敘述,并且對(duì)毛細(xì)管電泳有關(guān)高通量單細(xì)胞分析技術(shù)(包括單細(xì)胞分析技術(shù)、高通量單細(xì)胞檢測(cè))方面的研究進(jìn)行了概括。
　　 第二章,本實(shí)驗(yàn)采用毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光的方法,對(duì)谷胱甘肽(GSH)、抗壞血酸(AA)和多巴胺(DA)進(jìn)行了分離檢測(cè)。為了獲得GSH、AA和DA三種物質(zhì)的最佳分離檢測(cè)條件,考察了運(yùn)行緩沖液種類、pH值、濃度、分離

2、電壓,檢測(cè)電勢(shì)及Ru(bpy)32+濃度的影響,確定了最佳分離檢測(cè)條件為:pH7.8,濃度為50mmol·L-1的NaH2PO4-Na2HPO4緩沖液,分離電壓為15 kV,Ru(bpy)32+的濃度為2.0×10-3mol·L-1,檢測(cè)電位為1.3 V,在12 kV下電遷移進(jìn)樣10 s。在優(yōu)化條件下,三種物質(zhì)的檢測(cè)限(S/N=3)分別為:谷胱甘肽1.0×10-6mol·L-1,抗壞血酸1.0×10-6mol·L-1和多巴5.0×10-

3、7 mol·L-1。采用1.0×10-5 mol·L-1DA、5.0×10-4mol·L-1 GSH和1.0×10-5 mol·L-1AA混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次,電化學(xué)發(fā)光峰高的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為3.3％、2.2%和3.1%,遷移時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為1.1%、0.98%和1.2%。并且對(duì)人血血紅細(xì)胞溶膜液中的谷胱甘肽、抗壞血酸和多巴胺進(jìn)行了分離,加標(biāo)回收率分別為96%、105%和103%。
　　 第三章

4、,采用毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的方法,對(duì)香草扁桃酸(VMA)和高香草酸(HVA)進(jìn)行分離檢測(cè),實(shí)驗(yàn)中對(duì)于緩沖液種類、pH值及濃度大小、分離電壓、檢測(cè)電勢(shì)、及Ru(bpy)32+的濃度進(jìn)行了考察。我們確定了對(duì)兩種物質(zhì)的分離檢測(cè)最優(yōu)條件:pH8.250 mmol·L-1的NaH2PO4-Na2HPO4緩沖液,檢測(cè)電勢(shì)1.2 V,分離電壓為16 kV,Ru(bpy)32+的濃度為5 mmolL-1。在10 kV下電遷移進(jìn)樣10 s。在以上優(yōu)化

5、條件下,兩種物質(zhì)的檢測(cè)限(S/N=3)分別為:VMA5.0×10-7 mol·L-1,HVA6.1×10-7 mol·L-1。將VMA(1.0×10-5 mol·L-1)和HVA(1.0×10-5 mol·L-1)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣檢測(cè)6次,得到電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為2.7%和3.1%,遷移時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為1.1%和0.9%。并對(duì)尿樣中VNA和HVA進(jìn)行了檢測(cè),加標(biāo)回收率分別為98%和99%。<

6、br>　　 第四章,自制了高通量單細(xì)胞計(jì)數(shù)裝置,采用壓力控制細(xì)胞進(jìn)樣,實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)過(guò)程快捷。采用pH7.8濃度為20 mmol·L-1的NaH2PO4-Na2HPO4緩沖液作為流通介質(zhì),Ru(bpy)32+濃度為5.0×10-3 mol·L-1作為檢測(cè)條件,檢測(cè)電位為1.3 V,進(jìn)樣壓力為0.6 Mpa,對(duì)人血血紅細(xì)胞采用電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)進(jìn)行了計(jì)數(shù),單細(xì)胞的計(jì)數(shù)間隔約為20 s,細(xì)胞計(jì)數(shù)的發(fā)光強(qiáng)度與顯微鏡下觀察到的細(xì)胞流通情況相一致