毛細管電泳—電化學發(fā)光在臨床檢驗中的應用探索.pdf

1、目的:
　　建立CE-ECL方法檢測血漿中順苯磺酸阿曲庫銨及順苯磺酸阿曲庫銨的代謝物;建立CE-ECL間接檢測法，檢測兒茶酚胺(CA)和其代謝產(chǎn)物間甲腎上腺素類物質(zhì)(MNs)，應用于嗜鉻細胞瘤的診斷。
　　方法:
　　1.以羅庫溴銨作為內(nèi)標，用高氯酸沉淀血漿蛋白，利用序貫均勻設(shè)計法考察分離條件，建立CE-ECL法對順苯磺酸阿曲庫銨及其代謝物進行分離檢測。檢測時所用分離緩沖液為含12％乙腈的24 mmol/L磷酸緩沖液(

2、PBS)(pH2.9)，分離電壓設(shè)為13 kV，進樣電壓為16 kV，進樣時間為3s。ECL檢測池中為含2 mmol/L三聯(lián)吡啶釕(Ru(bpy)2+3)的100 mmol/L PBS(pH8.5)。
　　2.利用猝滅電化學發(fā)光法對腎上腺素類物質(zhì)進行檢測，檢測時所用分離緩沖液為含6μmol/L三丙胺(TPA)的30 mmol/L PBS(pH7.9)，分離電壓為17 kV，進樣電壓為16 kV，進樣時間為5s。ECL檢測池中為含0

3、.5 mmol/L Ru(bpy)2+3的100 mmol/L PBS緩沖液(pH8.5)。
　　3.利用甲醛對間甲腎上腺素類物質(zhì)進行衍生，使一級胺和二級胺變?yōu)槿壈罚岣咂潇`敏度，并用硼酸鹽緩沖體系作為背景，消除其酚基的猝滅效果，進一步提高信號進行檢測。檢測時所用分離緩沖液為100 mmol/L硼酸鹽緩沖液(pH8.5)，分離電壓為17 kV，進樣電壓為16 kV，進樣時間為10s。ECL檢測池中為含2 mmol/L Ru(bp

4、y)2+3的50mmol/L硼酸鹽緩沖液(pH8.5)。
　　結(jié)果:
　　1.CE-ECL檢測阿曲庫銨的線性范圍為0.100～40.0 mg/L，勞丹素的線性范圍為0.040～8.0 mg/L，所有成分檢測的遷移時間和ECL信號變異系數(shù)均小于3％，平均回收率為94.5～101.6％。
　　2.CE-ECL猝滅法檢測腎上腺素和去甲腎上腺素的線性范圍分別為33.0～3333.0μg/L and18.0～3380.0μg/L

5、，可用于嗜鉻細胞瘤病人尿液樣品腎上腺素類物質(zhì)的分析。
　　3.CE-ECL法檢測間甲腎上腺素類物質(zhì)的線性范圍為40.0～4000.0μg/L，可用于嗜鉻細胞瘤病人尿液樣品間甲腎上腺素類物質(zhì)的分析，以及部分嗜鉻細胞瘤病人的血漿樣品檢測。
　　結(jié)論:
　　本課題建立了CE-ECL檢測血漿中順苯磺酸阿曲庫銨及其分解產(chǎn)物的方法，為順苯磺酸阿曲庫銨的藥代動力學研究提供了極為簡便的方法。初步建立了CE-ECL間接檢測兒茶酚胺類物質(zhì)