柴胡醋制前后的化學(xué)及藥理比較研究.pdf

1、選題依據(jù)：柴胡為常用中藥材，作為傳統(tǒng)中藥應(yīng)用已有數(shù)千年歷史。中藥炮制是我國(guó)醫(yī)藥文化遺產(chǎn)中的主要組成部分，它在預(yù)防和控制疾病中扮演重要的角色，以確保其安全和有效的臨床應(yīng)用。柴胡經(jīng)醋制后變?yōu)榇撞窈?，同樣廣泛應(yīng)用于臨床。柴胡經(jīng)醋制后其化學(xué)和藥理作用都發(fā)生了改變，醋制柴胡中柴胡皂苷b1和b2的含量增加，柴胡皂苷a、c和d的含量降低，且揮發(fā)油的含量和成分也發(fā)生了一定的改變。且醋制柴胡疏肝利膽、止痛作用增強(qiáng)、其毒性作用也有所降低。然而，醋制引起柴胡

2、化學(xué)成分的差異未有全面、系統(tǒng)的研究，其藥理作用的比較也僅從常規(guī)的生化指標(biāo)及病理切片進(jìn)行比較，其作用機(jī)制仍不明確。此外，《中國(guó)藥典》收載的炮制用醋為米醋，然而在中國(guó)市場(chǎng)醋的種類(lèi)豐富，它們是否可作為炮制用醋，不同醋的種類(lèi)引起柴胡炮制的差異尚未研究。
　　目的：明確柴胡醋制前后化學(xué)成分的差異。比較它們的保肝作用及其毒性的異同，尋找差異代謝物，在體內(nèi)代謝物水平上初步探討其藥效作用機(jī)制及毒性作用機(jī)制。此外比較醋的種類(lèi)對(duì)醋制柴胡在化學(xué)和藥理作

3、用上的影響，為柴胡及醋制柴胡臨床應(yīng)用安全性和有效性提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：本研究用兩種醋（陳醋和米醋）進(jìn)行柴胡的炮制，以1H-NMR代謝組學(xué)比較柴胡醋制前后的化學(xué)差異，GC-MS結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析比較揮發(fā)油的變化，HPLC定量分析柴胡皂苷的轉(zhuǎn)化。此外，CCl4致小鼠肝損傷模型比較柴胡醋制前后的保肝作用，用大鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)比較它們的毒性作用，并用體液代謝組學(xué)評(píng)價(jià)去藥理及毒性機(jī)制。兩種不同的醋制柴胡的化學(xué)、藥理和毒性作用也進(jìn)行了比較，

4、以評(píng)價(jià)炮制過(guò)程中醋的影響。
　　結(jié)果：1.在化學(xué)成分的研究中，陳醋和米醋的pH值存在差異，1H-NMR提供整體的化合物輪廓圖，也可直觀看出兩種醋的差異。
　?。?）1H-NMR代謝組學(xué)結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析比較了柴胡醋制前后的化學(xué)成分的變化，在1H-NMR圖譜中共指認(rèn)了36個(gè)代謝物，柴胡和醋制柴胡可以明顯的區(qū)分開(kāi)，柴胡經(jīng)醋制后柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2、乙酸、蘋(píng)果酸等含量升高，柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、蔗糖等含量降低。兩種醋制柴胡也

5、可明顯分開(kāi)，蔗糖、甘氨酸、琥珀酸等含量存在差異。
　　（2）GC-MS結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析比較柴胡醋制前后揮發(fā)油的變化，結(jié)果表明醋制使柴胡揮發(fā)油的含量降低，化學(xué)成分也發(fā)生了變化，包括一些成分的出現(xiàn)（如2-壬基乙炔、α-畢澄茄烯、橙花叔醇）和另一些成分的消失（如β-蒎烯、正壬醛、馬鞭烯醇等），以及部分化合物含量的升高或降低（如十二醛、苯甲醛、愈創(chuàng)木酚）。兩種醋制柴胡的揮發(fā)油含量無(wú)顯著性差異，但一些成分（如戊醛、苯甲醛、硬脂酸等）的含量也

6、存在差異。
　?。?）HPLC定量分析了柴胡醋制前后的柴胡皂苷的含量變化，柴胡皂苷a和d含量降低，柴胡皂苷b1和b2的含量升高，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。兩種醋制柴胡的柴胡皂苷的含量也存在著差異。
　　2.在藥理作用的比較中，比較了柴胡生品及兩種醋制品對(duì)CCl4引起小鼠肝損傷的保護(hù)作用，通過(guò)1H-NMR進(jìn)行肝臟的代謝組學(xué)分析，共鑒定了9個(gè)相關(guān)的生物標(biāo)志物，包括丙氨酸、苯丙氨酸和?；撬岬?，涉及氨基酸代謝、?；撬岽x等。柴胡生品及其兩個(gè)炮

7、制品均有一定的肝保護(hù)作用，表現(xiàn)為病理切片的改善，生化指標(biāo)ALT和AST的回調(diào)，及部分差異代謝物回調(diào)。且醋制柴胡作用優(yōu)于生品柴胡，陳醋制柴胡的作用略?xún)?yōu)于米醋制柴胡。
　　3.在柴胡醋制前后毒性比較研究中，柴胡生品和醋制柴胡均有一定的毒性作用，表現(xiàn)為生化指標(biāo)ALT、AST和ALP的升高，及病理切片的改變。1H-NMR代謝組學(xué)進(jìn)一步探討柴胡的毒性作用機(jī)制，找到一些差異代謝物，其中肝臟中甲硫氨酸、谷氨酰胺和谷氨酸可以被認(rèn)為是肝損傷的潛在生

8、物標(biāo)志物，?；撬帷ⅧB(niǎo)氨酸、肌醇可以作為腎功能異常的潛在生物標(biāo)志物。這些差異代謝物可能參與氨基酸代謝、能量代謝、牛磺酸代謝和脂質(zhì)代謝等。柴胡生品及醋制柴胡對(duì)大鼠肝腎均有一定的毒性作用，且它們之間沒(méi)有顯著性差異，但綜合其生化指標(biāo)及代謝組學(xué)分析，兩種醋制的毒性作用略小于柴胡生品，兩種醋制柴胡的毒性作用也有一定的不同，相對(duì)而言，陳醋制柴胡的毒性較小。
　　結(jié)論：1.柴胡生品和醋制品在化學(xué)成分、保肝作用及毒性作用均存在著差異。醋制后柴胡的化