大鼠急性CO中毒遲發(fā)型腦病模型中海馬區(qū)Nrf2和HO1的動態(tài)表達(dá)及其作用研究.pdf

1、目的：創(chuàng)建急性CO中毒遲發(fā)性腦?。―EACMP）大鼠模型，檢驗(yàn)其行為學(xué)、形態(tài)學(xué)區(qū)別及轉(zhuǎn)錄因子 NF-E2相關(guān)因子2（Nrf2）和血紅素加氧酶1（HO-1）在大鼠海馬區(qū)的表達(dá)，初步探討Nrf2及HO-1在DEACMP發(fā)病機(jī)制中的作用及兩者可能存在的相互關(guān)系，為DEACMP發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步研究提供一定的基礎(chǔ)和方向。
　　方法：1、將168只無認(rèn)知功能障礙的健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分組：空白對照組(BC組)48只，空氣對照組（AC組)6

2、0只， DEACMP組(CO組)60只，每個(gè)組按染毒后第1d、3d、7d、14d、21d、28d六個(gè)時(shí)相點(diǎn)分為6個(gè)亞組，再將三組大鼠隨機(jī)分配到6個(gè)亞組中（CO組和AC組每個(gè)時(shí)相點(diǎn)10只大鼠，BC組每個(gè)時(shí)相點(diǎn)8只大鼠）；2、CO組采取改良式腹腔注射法制備 DEACMP大鼠模型，BC組以相同的方式注射等量空氣，AC組不做任何干預(yù)；3、采用Morris水迷宮試驗(yàn)測試大鼠染毒前后認(rèn)知學(xué)習(xí)記憶能力，并同時(shí)檢測大鼠體內(nèi)HbCO濃度，判斷造模是否成功

3、；4、HE法觀察大鼠海馬CA1區(qū)病理變化，Tunel法檢測大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞凋亡情況，免疫組化法檢測海馬CA1區(qū)Nrf2及HO-1蛋白的表達(dá)情況，Western Blot法檢測大鼠整個(gè)海馬Nrf2及HO-1的蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果：1、DEACMP模型的建立：①CO中毒癥狀：CO組大鼠染毒后出現(xiàn)躁動、呼吸急促、皮膚黏膜呈現(xiàn)櫻桃紅色、肢體癱軟、動作遲緩，部分大鼠出現(xiàn)肢體強(qiáng)直抽搐、甚至昏迷，其余兩組大鼠無上述異常改變；②動脈血HbC

4、O濃度變化：大鼠在染毒過程中體內(nèi)的HbCO濃度>50％維持時(shí)間超過16h；③Morris水迷宮結(jié)果：染毒前及染毒后7天內(nèi)三組大鼠平均躲避潛伏期無明顯差別（P>0.05），染毒后第14-28天 CO組大鼠平均逃避潛伏期較其余兩組顯著延伸（P<0.01），平臺所在象限運(yùn)動時(shí)間、穿越平臺次數(shù)亦較BC、AC組明顯減少（P<0.01）。2、HE染色：BC、AC組大鼠染毒前后神經(jīng)元形態(tài)基本正常，而CO組大鼠染毒后海馬區(qū)神經(jīng)元隨時(shí)間的變化出現(xiàn)不同程度

5、的病理改變：細(xì)胞水腫、核固縮、核碎裂、錐體細(xì)胞減少、排列稀疏紊亂等；3、Tunel檢測：BC組和AC組大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象不明顯，而CO組大鼠海馬CA1區(qū)凋亡細(xì)胞第1天起開始逐漸增多，第7天達(dá)高峰（20.20±1.78）后逐漸減少，第28天凋亡仍然存在，且每個(gè)時(shí)間點(diǎn)其凋亡指數(shù)較BC組和AC組均顯著增高（P<0.01）。4、Nrf2和HO-1蛋白的表達(dá)：①免疫組化法：Nrf2和HO-1蛋白在BC組和AC組大鼠海馬CA1區(qū)表達(dá)均不明

6、顯，且各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），在CO組大鼠染毒后第1天Nrf2和HO-1即開始增高，均在第3天達(dá)高峰（8.20±1.08，9.04±1.13）后開始減少，第28天仍維持在較高表達(dá)水平，且二者表達(dá)在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均較AC組、BC組明顯增加（P<0.01）；②蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）檢測：AC、BC組大鼠海馬Nrf2及HO-1蛋白表達(dá)量較少，且各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），CO組大鼠海馬Nr

7、f2及HO-1蛋白表達(dá)量均呈現(xiàn)出增高-高峰（第3天）-降低的趨勢，在第28天表達(dá)量仍處于較高水平，且二者表達(dá)在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均較AC組、BC組明顯增加（P<0.01）。
　　結(jié)論：1、改良式腹腔間隔注射法創(chuàng)建DEACMP模子，與人類起病的病理程序相似，操作簡化易行，相對安全，實(shí)驗(yàn)器材常見，CO劑量易控制，是一種制備DEACMP動物模型比較理想的方法；2、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)通過測試大鼠染毒前后的行為學(xué)改變（認(rèn)知學(xué)習(xí)記憶能力），結(jié)合大

8、鼠體內(nèi)HbCO濃度，可初步判斷大鼠是否出現(xiàn)DEACMP；3、大鼠DEACMP的發(fā)生發(fā)展很可能與大鼠海馬區(qū)錐體細(xì)胞遲發(fā)性凋亡有關(guān)；4、Nrf2和HO-1在DEACMP的發(fā)病機(jī)制中起著雙重作用：在CO中毒前期（3天內(nèi)），大鼠海馬Nrf2快速增高，通過促進(jìn)其下游因子HO-1的表達(dá)，共同發(fā)揮抗細(xì)胞凋亡的作用；而后期（3天后） Nrf2持續(xù)過量表達(dá)，導(dǎo)致下游因子 HO-1及其產(chǎn)物的堆積，很可能又促進(jìn)了海馬區(qū)錐體細(xì)胞發(fā)生遲發(fā)性凋亡，是CO中毒發(fā)展為