肺炎支原體LAMPs激活Nrf2及其對HO-1和NQO1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，Mp）感染所引起的一系列炎癥反應(yīng)很大程度上是其細(xì)胞膜上的脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白（lipid-associated membrane proteins, LAMPs）所致。本研究旨在探討 MP LAMPs能否激活人單核細(xì)胞系THP-1中的核因子NF-E2相關(guān)因子2（Nuclear factor erythroid2-related factor2， NF-E2-related fact

2、or2，Nrf2），誘導(dǎo)血紅素氧合酶-1（Hemeoxygenase，HO-1）和醌氧化還原酶（NADPH:quinine oxidoreductase，NQO1）的表達(dá)。
　　方法：培養(yǎng)Mp M129菌株至對數(shù)生長期，離心收集沉淀，抽提LAMPs， BCA法測定LAMPs濃度。體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，CCK-8檢測LAMPs的細(xì)胞毒性；Western blot檢測LAMPs刺激THP-1細(xì)胞表達(dá)HO-1及NQO1的劑量依賴性及時(shí)

3、間依賴性；比色法分析HO-1酶活性改變情況；Western blot及免疫熒光技術(shù)檢測LAMPs刺激THP-1后Nrf2在細(xì)胞核及胞漿中的表達(dá)以了解Nrf2的核轉(zhuǎn)位。實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（qRT-PCR）檢測LAMPs刺激Nrf2 siRNA預(yù)處理的THP-1細(xì)胞HO-1和NQO1 mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1. LAMPs的濃度為1.029mg/mL.
　　2.用CCK-8檢測LAMPs對THP-1細(xì)胞的

4、毒性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PBS組和各濃度LAMPs作用組450nm波長光吸收值差異無顯著性（P＞0.05）。
　　3. LAMPs可刺激 THP-1細(xì)胞表達(dá) HO-1和NQO1，且 NQO1表達(dá)水平與LAMPs濃度呈劑量依賴性，HO-1的表達(dá)在LAMPs濃度為0~10μg/mL范圍內(nèi)先上升后遞減，5.0μg/mL LAMPs刺激表達(dá)的HO-1最高。
　　4. HO-1和NQO1的蛋白表達(dá)隨LAMPs刺激時(shí)間均呈先上升后下降的趨勢，&n

5、bsp;作用12h表達(dá)水平最高。
　　5.5.0μg/mL的LAMPs作用THP-1細(xì)胞12h后HO-1酶活性為（1.278±0.171） nmol/mg/h，較PBS組顯著增高（P＜0.01），與LPS處理組差異無顯著性（P＞0.05）。
　　6. LAMPs刺激THP-1細(xì)胞，胞漿內(nèi)Nrf2表達(dá)水平逐漸減少，而細(xì)胞核內(nèi)蛋白表達(dá)逐漸增高。
　　7. Nrf2 siRNA可降低THP-1細(xì)胞Nrf2 mRNA的表達(dá)。L