肺炎支原體LAMPs激活Nrf2及其對HO-1和NQO1表達的影響.pdf

1、目的：肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，Mp）感染所引起的一系列炎癥反應很大程度上是其細胞膜上的脂質相關膜蛋白（lipid-associated membrane proteins, LAMPs）所致。本研究旨在探討 MP LAMPs能否激活人單核細胞系THP-1中的核因子NF-E2相關因子2（Nuclear factor erythroid2-related factor2， NF-E2-related fact

2、or2，Nrf2），誘導血紅素氧合酶-1（Hemeoxygenase，HO-1）和醌氧化還原酶（NADPH:quinine oxidoreductase，NQO1）的表達。
　　方法：培養(yǎng)Mp M129菌株至對數(shù)生長期，離心收集沉淀，抽提LAMPs， BCA法測定LAMPs濃度。體外培養(yǎng)THP-1細胞，CCK-8檢測LAMPs的細胞毒性；Western blot檢測LAMPs刺激THP-1細胞表達HO-1及NQO1的劑量依賴性及時

3、間依賴性；比色法分析HO-1酶活性改變情況；Western blot及免疫熒光技術檢測LAMPs刺激THP-1后Nrf2在細胞核及胞漿中的表達以了解Nrf2的核轉位。實時定量逆轉錄PCR（qRT-PCR）檢測LAMPs刺激Nrf2 siRNA預處理的THP-1細胞HO-1和NQO1 mRNA的表達水平。
　　結果：
　　1. LAMPs的濃度為1.029mg/mL.
　　2.用CCK-8檢測LAMPs對THP-1細胞的

4、毒性，結果發(fā)現(xiàn)PBS組和各濃度LAMPs作用組450nm波長光吸收值差異無顯著性（P＞0.05）。
　　3. LAMPs可刺激 THP-1細胞表達 HO-1和NQO1，且 NQO1表達水平與LAMPs濃度呈劑量依賴性，HO-1的表達在LAMPs濃度為0~10μg/mL范圍內先上升后遞減，5.0μg/mL LAMPs刺激表達的HO-1最高。
　　4. HO-1和NQO1的蛋白表達隨LAMPs刺激時間均呈先上升后下降的趨勢，&n

5、bsp;作用12h表達水平最高。
　　5.5.0μg/mL的LAMPs作用THP-1細胞12h后HO-1酶活性為（1.278±0.171） nmol/mg/h，較PBS組顯著增高（P＜0.01），與LPS處理組差異無顯著性（P＞0.05）。
　　6. LAMPs刺激THP-1細胞，胞漿內Nrf2表達水平逐漸減少，而細胞核內蛋白表達逐漸增高。
　　7. Nrf2 siRNA可降低THP-1細胞Nrf2 mRNA的表達。L