肺炎支原體LAMPs經(jīng)PI3K-Nrf2誘導(dǎo)人單核細(xì)胞表達(dá)HO-1.pdf

1、目的：
　　探討肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，Mp）脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白（lipid-associated membrane proteins，LAMPs）對(duì)人單核細(xì)胞表達(dá)血紅素氧合酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）的影響，并探討可能的調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，用不同濃度的LAMPs作用后，分別采用realtime-PCR和Western blot檢測(cè)HO

2、-1 mRNA和蛋白的表達(dá)。同時(shí)采用不同濃度的放線菌素D（ActD）和放線菌酮（CHX）預(yù)處理細(xì)胞，觀察其對(duì)HO-1表達(dá)的影響，以證實(shí)HO-1的表達(dá)是否通過轉(zhuǎn)錄和翻譯水平；提取LAMPs作用前后的核蛋白，凝膠遷移率實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Nrf2的核轉(zhuǎn)位、Western blot檢測(cè)Akt的磷酸化情況；同時(shí)采用PI3K抑制劑LY294002處理細(xì)胞，觀察其對(duì)LAMPs誘導(dǎo)Nrf2核轉(zhuǎn)位及HO-1表達(dá)的影響；最后采用 siRNA干擾Nrf2表達(dá)，以證實(shí)N

3、rf2是否參與調(diào)控HO-1表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　(1)0～5μg/mL LAMPs能以劑量依賴性方式誘導(dǎo)THP-1表達(dá)HO-1 mRNA和蛋白；
　　(2)5μg/mL LAMPs能誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞Akt磷酸化，并能增強(qiáng)其DNA結(jié)合活性；PI3K抑制劑 LY294002處理后，可明顯抑制 LAMPs誘導(dǎo)的HO-1表達(dá)和Nrf2核轉(zhuǎn)位；
　　(3)干擾Nrf2表達(dá)后，可明顯下調(diào)LAMPs誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)H