綿羊肺炎支原體誘導肺臟上皮細胞自噬的初步研究.pdf

1、綿羊肺炎支原體（Mycoplasma ovipneumoniae，MO）可以引起綿羊(Ovis aries)傳染性胸膜肺炎(Contagious ovine pleuropneumonia)。該病分布面積廣泛，給養(yǎng)羊業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。近年來多項研究表明，MO能夠黏附到綿羊肺臟細胞，并對宿主細胞造成極大危害。但宿主細胞與MO感染的關(guān)系仍不明確。
　　細胞自噬（autophagy）是廣泛存在于真核生物中維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的一種生理

2、現(xiàn)象。自噬發(fā)生時，可通過自噬溶酶體對細胞內(nèi)的衰老細胞器和長壽蛋白進行吞噬和降解，降解產(chǎn)物被用于重新合成蛋白質(zhì)以維護細胞器功能及細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)等。近年來研究表明，自噬在機體抗感染免疫過程中也發(fā)揮著重要功能。
　　目的:
　　通過建立MO感染的細胞模型，驗證MO是否會誘導自噬的發(fā)生，以及自噬對MO的感染有何作用。
　　方法:
　　本實驗以鼠肺臟上皮細胞TC-1為研究對象，通過建立MO感染的細胞模型，檢測MO（感染復數(shù)

3、10∶1）感染0h、6h、12h、24 h細胞的自噬狀態(tài)，同時設(shè)立不同時期的空白對照;并運用RNAi技術(shù)研究自噬與細胞清除MO的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　(1)透射電子顯微鏡結(jié)果顯示，MO感染TC-1細胞6h后，出現(xiàn)了雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體，12h、24h均可發(fā)現(xiàn)自噬體和自噬溶酶體。
　　(2)熒光顯微鏡結(jié)果顯示，MO感染TC-1細胞6h后，LC3A/B蛋白大量聚集，表明自噬體的出現(xiàn)，自噬已開始發(fā)生;12h、24h時，自噬現(xiàn)

4、象更為明顯。
　　(3)qPCR和Western blot結(jié)果顯示，MO感染TC-1細胞后，自噬相關(guān)基因LC3A/B、P62、Atg7在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平明顯升高，且差異性顯著。
　　(4)CCU實驗結(jié)果顯示，TC-1細胞對MO具有一定清除作用。
　　(5)RNAi技術(shù)沉默自噬關(guān)鍵基因P62和Atg7，抑制自噬的發(fā)生，TC-1細胞對MO的清除能力降低，說明自噬參與了TC-1細胞對MO的清除。
　　結(jié)論: