綿羊肺炎支原體莢膜多糖對支氣管上皮細胞炎性反應與氧化損傷的作用機制研究.pdf

1、綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoniae，MO)是從綿羊或山羊支氣管中分離得到的一種最常見的病原菌，主要引起羊支原體肺炎?；疾⊙蚺R床上以漸進性消瘦、高熱、氣喘、持續(xù)性咳嗽、肺和胸膜發(fā)生漿液性和纖維素性炎癥為特征。而與其他支原體相比，目前對于綿羊肺炎支原體致病機制的研究還非常有限，但普遍認為準確的黏附作用應當是決定其是否能夠成功感染的關鍵。綿羊肺炎支原體無細胞壁結構，感染宿主機體時主要通過膜外的莢膜樣物質介導菌體與

2、宿主細胞間的相互作用。已有報道證實莢膜多糖（capsular polysaccharides，CPS）是位于綿羊肺炎支原體菌體最外層的一種重要毒力因子，其在菌體抗干燥、粘附、侵入、傳播以及抵抗宿主細胞的固有免疫和特異性免疫防御機制等方面的作用正被逐漸認識。
　　本研究在成功提取并純化了綿羊肺炎支原體模式株Y98莢膜多糖(CPS)的基礎上，制備了CPS的多克隆抗體，并利用綿羊支氣管原代上皮細胞氣液相(air-liquid inter

3、face，ALI)培養(yǎng)模型，對CPS誘發(fā)免疫學炎性反應與氧化損傷過程中的分子機制進行了探究。研究首先發(fā)現(xiàn)，綿羊肺炎支原體CPS刺激ALI支氣管原代上皮細胞后誘導了TLRs級聯(lián)信號通路介導的免疫學炎性反應的發(fā)生。TLRs信號中MyD88、IRAKs、TRAF6、p-NF-κB、p-AP-1、IRF5與TRAF3、TBK1、IRF3等關鍵通路蛋白與核轉錄因子的表達量在CPS刺激后均呈現(xiàn)出明顯的上調趨勢，表明TLRs級聯(lián)的MyD88依賴性與M

4、yD88非依賴性信號轉導通路在支氣管上皮細胞響應CPS刺激的過程中均扮演重要角色。研究同時發(fā)現(xiàn)CPS抗體的預處理可以顯著下調由綿羊肺炎支原體感染所誘導的炎性相關因子（包括促炎性細胞因子IL1β、IL6、IL8和TNFα等，抑炎性細胞因子IL10和TGFβ等）的高表達，提示CPS是綿羊肺炎支原體的一個重要毒力因子，其致病機制可能是通過誘導支氣管周圍大量炎癥相關因子的釋放，從而實現(xiàn)對宿主免疫學炎癥反應的調控。此外，分子機制研究表明綿羊肺炎支

5、原體CPS可以通過線粒體介導的內源性途徑與死亡受體介導的外源性途徑同時誘導支氣管上皮細胞的凋亡，JNK/P38 MAPK信號通路在此過程中起重要的促凋亡作用。值得注意的是，CPS誘發(fā)宿主細胞凋亡的過程伴隨ROS的高表達，ROS清除劑NAC的預處理可以明顯抑制這一現(xiàn)象的發(fā)生，因此提示ROS的過量產生可能是誘導綿羊支氣管原代上皮細胞凋亡的直接因素之一。
　　以上的研究結果揭示，TLRs信號介導的炎性反應與ROS介導的細胞凋亡在支氣管上