Nrf2及NQO1在膀胱癌中的表達及意義.pdf

1、目的:
　　 膀胱癌是泌尿系腫瘤中最常見的腫瘤，其發(fā)生發(fā)展是一個多基因多階段的過程，是環(huán)境和遺傳因素共同作用的結(jié)果。高發(fā)、多發(fā)、復發(fā)為其特點，淺表性腫瘤易復發(fā)，浸潤性和轉(zhuǎn)移性腫瘤預后則較差。從功能角度看，膀胱癌屬蛋白組性疾病。因此在研究癌基因及抑癌基因的同時腫瘤專家們開始關(guān)注癌細胞表面向細胞核內(nèi)信息傳遞過程，試圖揭示腫瘤的發(fā)生發(fā)展機制。紅系衍生的核因子2相關(guān)因子(Nrf2)屬于CNC轉(zhuǎn)錄因子家族成員，是參與生物體內(nèi)抗氧化應激反應

2、的一種重要轉(zhuǎn)錄因子。NQO1是醌氧化還原酶，為Nrf2/ARE抗氧化系統(tǒng)中下游調(diào)節(jié)序列表達蛋白。大量的研究證實Nrf2可在肝臟、消化道、肺臟、心血管系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)中高表達，究其原因是因為Nrf2作為抗氧化元件，能夠減少有害的內(nèi)源性和外源性的刺激物對正常細胞的損傷。研究表明Nrf2參與了多種器官的抗氧化反應，在氧化應激反應中發(fā)揮了重要作用。目前Nrf2在腎、肺、肝等代謝器官中的作用研究較多，非代謝器官中的作用研究較少，且大多為動物實驗，人

3、體病理標本實驗研究報道較少。研究表明Nrf2在促進肝臟解毒的同時會增加膀胱致癌物質(zhì)如4-氨基聯(lián)苯、丁基氫醌的暴露機會。本研究擬檢測Nrf2、NQO1分別在膀胱癌組織及癌旁組織中的表達水平，探討Nrf2/ARE信號傳導通路在膀胱癌中的作用及其機制，從而進一步了解膀胱癌的發(fā)病機制，為膀胱癌的診治提供新的思路。
　　 方法:
　　 選取2011年6月至2012年9月河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院泌尿外科住院手術(shù)病人的46例膀胱癌組織和1

4、8例癌旁組織（距瘤體邊緣5cm以外，病理證實為正常膀胱組織），其中男性26例，女性20例，年齡45至77歲，平均年齡56.6歲，全部病例術(shù)前均未經(jīng)任何放療、化療。標本分為兩份，一份經(jīng)10％甲醛溶液固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，另一份保存于液氮中。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)2004年分類標準進行病理分級:高級別19例，低級別27例;根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟2002年TNM分期標準進行臨床分期:非肌層浸潤性膀胱癌（Tis-T1）30例，肌層浸潤

5、性膀胱癌（T2-T4）16例。
　　 1.免疫組織化學方法檢測:從蛋白水平檢測46例患者膀胱癌組織和18例癌旁組織中Nrf2及NQO1的表達。統(tǒng)計染色陽性率數(shù)值，運用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，比較膀胱癌組織和癌旁組織中Nrf2及NQO1的陽性表達率之間的差異，以及與病理分級、臨床分期及轉(zhuǎn)移的關(guān)系。采用x2檢驗或Fisher確切概率法檢驗，認為P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。Nrf2與NQO1關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析。

6、
　　 2.Westernblotting檢測:將膀胱癌組織及癌旁組織于冰浴下制成勻漿，離心分離取上清液，進行蛋白定量，取蛋白提取液100μg，按比例與上樣緩沖液混勻，煮沸，上樣，進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，半干轉(zhuǎn)膜法至PVDF膜上，置于封閉液中封閉，隨后與相應的一抗、二抗試劑反應，用化學發(fā)光法檢測結(jié)合區(qū)帶，數(shù)碼成像分析系統(tǒng)軟件對結(jié)果進行定量分析。將Nrf2及NQO1蛋白條帶的光密度與相應的內(nèi)參蛋白β-actin條帶的光密度

7、的比值做為蛋白表達的相對表達值，采用配對t檢驗進行統(tǒng)計學分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.免疫組織化學染色結(jié)果顯示:Nrf2蛋白在膀胱癌組織中及癌旁組織中陽性表達率分別76.1％和27.8％，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);NQO1蛋白在膀胱癌組織中及癌旁組織中陽性表達率分別71.7％和22.2％，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);Nrf2、NQO1蛋白在膀胱癌組織中的表達與腫瘤分級、臨床分期及浸潤轉(zhuǎn)移呈正相關(guān);Nrf2

8、與NQO1在膀胱癌組織中表達呈正相關(guān)(r=0.678，P＜0.01)。
　　 2.Westernblotting檢測結(jié)果顯示:取18例癌旁組織與相應膀胱癌組織，Westernblotting抗原抗體區(qū)帶定量，比較分析膀胱癌組織Nrf2、NQO1蛋白水平高于癌旁組織，Nrf2在膀胱癌組織中相對表達量為0.2153±0.0202，在癌旁組織中的相對表達量為0.1784±0.0185差異有統(tǒng)計學意義（t=7.723P=0.000），N

9、QO1蛋白在膀胱癌中相對表達量為0.1759±0.0135，在癌旁組織中的相對表達量為0.1585±0.0132，二者差異有統(tǒng)計學意義(t=4.344P=0.000)。
　　 結(jié)論:
　　 1.Nrf2、NQO1蛋白在膀胱癌組織中的表達高于癌旁組織中的表達。
　　 2.Nrf2、NQO1蛋白在膀胱癌組織中的表達與腫瘤分級、臨床分期及浸潤轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。
　　 3.Nrf2蛋白與NQO1蛋白在膀胱癌組織中的表