Livin、Caspase-3和MVD在膀胱癌中的表達及意義.pdf

1、膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中最常見的腫瘤,在世界范圍內,膀胱癌發(fā)病率居惡性腫瘤的第九位,男性中排名第六位,女性排在第十位之后;在我國,男性膀胱癌發(fā)病率位居全身腫瘤的第八位,女性排在第十二位之后。膀胱癌的發(fā)生機制至今尚不完全清楚,同體內其它器官腫瘤的發(fā)生一樣,也是多種致癌的危險因素長期在正常細胞內作用,導致原癌基因的激活,繼而經(jīng)過一系列復雜的信號傳導過程影響細胞周期的運轉。在復制及轉錄過程中又因抑癌基因的缺失或失活不能修復受損的DNA,也不能使細胞

2、進入正常的凋亡,使攜帶有異常DNA的細胞無限制地復制、增殖而致癌。Livin基因是2000年發(fā)現(xiàn)的抑制細胞凋亡基因,位于人染色體20 q13.3,全長4.6 kb,包含7個外顯子及6個內含子,其基因轉錄產(chǎn)物有兩種mRNA亞型,分別編碼298個氨基酸蛋白質(α)和280個氨基酸蛋白質(β)。和其它IAPs家族成員一樣,Livin基因含有BIR和RING指結構域,主要通過與Caspase家族相互作用,抑制其介導級聯(lián)激活反應引起的細胞凋亡,促

3、使腫瘤的發(fā)生。Livin在正常成人的大多數(shù)組織中(除了胎盤)均不表達,表皮、淋巴、脾臟和黑色素細胞中表達很低。在胎兒發(fā)育過程中多種組織高表達,如胎兒的腦、胸腺、腎臟和肝臟。研究發(fā)現(xiàn)Livin在一些癌細胞系中高表達,如淋巴瘤、HaCat細胞、MCF7乳腺癌細胞,以黑色素瘤細胞系中表達水平最高;在膀胱癌細胞中,Livin的α和β亞型均表達,但在膀胱癌中Livin、Caspase-3、MVD的表達及其與腫瘤復發(fā)的研究尚未見相關報道。本實驗采用

4、免疫組化SP法檢測在正常膀胱組織、膀胱癌組織中Livin蛋白、Caspase-3蛋白的表達以及MVD的表達情況,并分析其相關性。目的探討Livin、Caspase-3和MVD在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為膀胱癌的臨床診斷、治療和預后提供新的方法。
　　材料與方法：收集鄭州大學第一附屬醫(yī)院2006年1月~2006年12月65例膀胱癌的手術切除標本,其中男38例,女27例,年齡29~78歲,平均62.5歲。術前均未接受過放療或化療。病理

5、類型均為膀胱移行細胞癌。按WHO1973年病理分級:Ⅰ級25例、Ⅱ級28例、Ⅲ級12例;臨床分期:Tis-T1期39例、T2-T4期26例;術后隨訪1.5~2年,其中28例術后復發(fā),37例術后無復發(fā)。同時取10例癌旁正常組織(取自膀胱全切病例距腫瘤邊緣>5cm)作對照組。全部標本均用福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋,4um厚連續(xù)切片。使用兔抗人Livin多克隆抗體、兔抗人Caspase-3多克隆抗體以及鼠抗人CD34單克隆抗體,通過免疫組化S

6、P法檢測Livin、Caspase-3和CD34蛋白在65例膀胱癌組織、10例正常膀胱組織中的表達。統(tǒng)計分析采用SPSS10.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理,按照病理分級、臨床分期、有無復發(fā)分類統(tǒng)計,對每個指標用X2檢驗、Fisher’s精確概率檢驗或t檢驗進行分析;Livin、Caspase-3之間的相關性用皮爾遜積差相關(Pearson)作相關分析,以α=0.05作為差異有統(tǒng)計學意義檢驗水準。
　　結果：1.Livin蛋白表達的陽性信號

7、主要定位于癌細胞的胞漿和/或胞核,并且以胞漿為主。65例膀胱癌中有53例顯示陽性表達,陽性率為81.54％(53/65)。10例正常膀胱組織中未見Livin蛋白陽性表達。Livin蛋白在膀胱癌中的表達明顯高于正常膀胱組織,兩者相比差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。Livin蛋白在膀胱癌不同病理分級Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級中的陽性表達率分別為:76.00％(19/25)、85.71％(24/28)、83.33％(10/12),三組相比差異無統(tǒng)

8、計學意義(P=0.651);Livin蛋白在膀胱癌不同臨床分期Tis-T1期、T2-T4期中的陽性表達率分別為:79.49％(31/39)、84.62(22/26),兩組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.845);Livin蛋白在膀胱癌復發(fā)組、無復發(fā)組中的陽性表達率分別為92.86％(26/28)、70.27(26/37),兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P=0.024)。2.Caspase-3蛋白表達的陽性信號主要定位于癌細胞的胞漿和/或胞核,

9、并且以胞漿為主。65例膀胱癌中有30例顯示陽性表達,陽性率為46.15％(30/65)。10例正常膀胱組織中有9例Caspase-3蛋白陽性表達,陽性率為90.00％(9/10)。Caspase-3蛋白在正常膀胱組織中的表達明顯高于膀胱癌,兩者相比差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.025)。Caspase-3蛋白在膀胱癌不同病理分級Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級中的陽性表達率分別為:68.00％(17/25)、35.71％(10/28)、25.00％(3/

10、12),三組相比差異有統(tǒng)計學意義(P=0.017);經(jīng)X2分割,檢驗水準α=0.0167,Ⅰ級與Ⅱ級之間差異無統(tǒng)計學意義(P=0.019),Ⅰ級與Ⅲ級相比差異有統(tǒng)計學意義(P=0.014),Ⅱ級與Ⅲ級相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.768)。Caspase-3蛋白在膀胱癌不同臨床分期Tis-T1期、T2-T4期中的陽性表達率分別為:48.72％(19/39)、42.31(11/26),兩組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.612);Caspa

11、se-3蛋白在膀胱癌復發(fā)組、無復發(fā)組中的陽性表達率分別為32.14％(9/28)、64.86(24/37),兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P=0.009)。3.在膀胱癌組織中,53例Livin蛋白陽性表達中,有34例Caspase-3蛋白呈陰性表達;12例Livin蛋白陰性表達中,有11例Caspase-3蛋白呈陽性表達;共同陽性表達有19例,共同陰性表達的有1例。用皮爾遜積差相關(Pearson)作相關分析顯示:Livin蛋白與Caspa

12、se-3蛋白在膀胱癌組織中的表達呈負相關(P=0.000,r=-0.434)。4.血管內皮細胞染成棕黃色為CD34陽性。以顯微鏡在400倍視野下選取5個血管數(shù)目最多的視野,計數(shù)血管數(shù),計算其平均數(shù)即為MVD。65例膀胱癌組織中的MVD為6.20~38.25個/高倍視野,平均值18.42±1.96。10例正常膀胱組織中的MVD為1.25~3.21個/高倍視野,平均值2.14±0.42。兩者相比差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。MVD在膀

13、胱癌不同病理分級Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級中的平均值分別為:13.25±1.17、16.95±1.87、32.64±1.66,三組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05):Ⅰ級與Ⅱ級、Ⅰ級與Ⅲ級、Ⅱ級與Ⅲ級之間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。MVD在膀胱癌不同臨床分期Tis-T1期、T2-T4期中的平均值分別為:14.25±1.30、24.69±3.26,兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000);MVD在膀胱癌復發(fā)組、無復發(fā)組中的平均值分別為:

14、22.63±2.61、12.86±1.15,兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。
　　結論：1.Livin蛋白在膀胱癌組織中呈高表達,而在正常膀胱組織中無表達。Livin蛋白的表達可能與膀胱癌的病理分級、臨床分期無關系;而與腫瘤有無復發(fā)有關系,可以作為評價膀胱癌預后的指標。2.Caspase-3蛋白在正常膀胱組織中呈高表達,在膀胱癌組織中表達降低。Caspase-3蛋白的表達與臨床分期無關系;而與病理分級、腫瘤有無復發(fā)關系

15、密切。Caspase-3蛋白表達下調可能與膀胱癌的發(fā)生以及預后呈正相關。3.在膀胱癌組織中,Livin蛋白的表達與Caspase-3蛋白呈負相關。提示Livin通過抑制Caspase-3的活性,導致Caspase-3介導的細胞凋亡不足可能是膀胱癌發(fā)生的機制之一。4.膀胱癌組織中MVD值明顯高于正常膀胱組織。MVD值在膀胱癌的不同病理分級、臨床分期以及腫瘤有無復發(fā)均有差異,提示其可以作為膀胱癌細胞生物學行為的一個指標,來預測膀胱癌的復發(fā)風