Livin、Caspase-3和MVD在膀胱癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中最常見的腫瘤,在世界范圍內(nèi),膀胱癌發(fā)病率居惡性腫瘤的第九位,男性中排名第六位,女性排在第十位之后;在我國(guó),男性膀胱癌發(fā)病率位居全身腫瘤的第八位,女性排在第十二位之后。膀胱癌的發(fā)生機(jī)制至今尚不完全清楚,同體內(nèi)其它器官腫瘤的發(fā)生一樣,也是多種致癌的危險(xiǎn)因素長(zhǎng)期在正常細(xì)胞內(nèi)作用,導(dǎo)致原癌基因的激活,繼而經(jīng)過(guò)一系列復(fù)雜的信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程影響細(xì)胞周期的運(yùn)轉(zhuǎn)。在復(fù)制及轉(zhuǎn)錄過(guò)程中又因抑癌基因的缺失或失活不能修復(fù)受損的DNA,也不能使細(xì)胞

2、進(jìn)入正常的凋亡,使攜帶有異常DNA的細(xì)胞無(wú)限制地復(fù)制、增殖而致癌。Livin基因是2000年發(fā)現(xiàn)的抑制細(xì)胞凋亡基因,位于人染色體20 q13.3,全長(zhǎng)4.6 kb,包含7個(gè)外顯子及6個(gè)內(nèi)含子,其基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物有兩種mRNA亞型,分別編碼298個(gè)氨基酸蛋白質(zhì)(α)和280個(gè)氨基酸蛋白質(zhì)(β)。和其它IAPs家族成員一樣,Livin基因含有BIR和RING指結(jié)構(gòu)域,主要通過(guò)與Caspase家族相互作用,抑制其介導(dǎo)級(jí)聯(lián)激活反應(yīng)引起的細(xì)胞凋亡,促

3、使腫瘤的發(fā)生。Livin在正常成人的大多數(shù)組織中(除了胎盤)均不表達(dá),表皮、淋巴、脾臟和黑色素細(xì)胞中表達(dá)很低。在胎兒發(fā)育過(guò)程中多種組織高表達(dá),如胎兒的腦、胸腺、腎臟和肝臟。研究發(fā)現(xiàn)Livin在一些癌細(xì)胞系中高表達(dá),如淋巴瘤、HaCat細(xì)胞、MCF7乳腺癌細(xì)胞,以黑色素瘤細(xì)胞系中表達(dá)水平最高;在膀胱癌細(xì)胞中,Livin的α和β亞型均表達(dá),但在膀胱癌中Livin、Caspase-3、MVD的表達(dá)及其與腫瘤復(fù)發(fā)的研究尚未見相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用

4、免疫組化SP法檢測(cè)在正常膀胱組織、膀胱癌組織中Livin蛋白、Caspase-3蛋白的表達(dá)以及MVD的表達(dá)情況,并分析其相關(guān)性。目的探討Livin、Caspase-3和MVD在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為膀胱癌的臨床診斷、治療和預(yù)后提供新的方法。
　　材料與方法：收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2006年1月~2006年12月65例膀胱癌的手術(shù)切除標(biāo)本,其中男38例,女27例,年齡29~78歲,平均62.5歲。術(shù)前均未接受過(guò)放療或化療。病理

5、類型均為膀胱移行細(xì)胞癌。按WHO1973年病理分級(jí):Ⅰ級(jí)25例、Ⅱ級(jí)28例、Ⅲ級(jí)12例;臨床分期:Tis-T1期39例、T2-T4期26例;術(shù)后隨訪1.5~2年,其中28例術(shù)后復(fù)發(fā),37例術(shù)后無(wú)復(fù)發(fā)。同時(shí)取10例癌旁正常組織(取自膀胱全切病例距腫瘤邊緣>5cm)作對(duì)照組。全部標(biāo)本均用福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋,4um厚連續(xù)切片。使用兔抗人Livin多克隆抗體、兔抗人Caspase-3多克隆抗體以及鼠抗人CD34單克隆抗體,通過(guò)免疫組化S

6、P法檢測(cè)Livin、Caspase-3和CD34蛋白在65例膀胱癌組織、10例正常膀胱組織中的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS10.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,按照病理分級(jí)、臨床分期、有無(wú)復(fù)發(fā)分類統(tǒng)計(jì),對(duì)每個(gè)指標(biāo)用X2檢驗(yàn)、Fisher’s精確概率檢驗(yàn)或t檢驗(yàn)進(jìn)行分析;Livin、Caspase-3之間的相關(guān)性用皮爾遜積差相關(guān)(Pearson)作相關(guān)分析,以α=0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：1.Livin蛋白表達(dá)的陽(yáng)性信號(hào)

7、主要定位于癌細(xì)胞的胞漿和/或胞核,并且以胞漿為主。65例膀胱癌中有53例顯示陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性率為81.54％(53/65)。10例正常膀胱組織中未見Livin蛋白陽(yáng)性表達(dá)。Livin蛋白在膀胱癌中的表達(dá)明顯高于正常膀胱組織,兩者相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。Livin蛋白在膀胱癌不同病理分級(jí)Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為:76.00％(19/25)、85.71％(24/28)、83.33％(10/12),三組相比差異無(wú)統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)意義(P=0.651);Livin蛋白在膀胱癌不同臨床分期Tis-T1期、T2-T4期中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為:79.49％(31/39)、84.62(22/26),兩組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.845);Livin蛋白在膀胱癌復(fù)發(fā)組、無(wú)復(fù)發(fā)組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為92.86％(26/28)、70.27(26/37),兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.024)。2.Caspase-3蛋白表達(dá)的陽(yáng)性信號(hào)主要定位于癌細(xì)胞的胞漿和/或胞核,

9、并且以胞漿為主。65例膀胱癌中有30例顯示陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性率為46.15％(30/65)。10例正常膀胱組織中有9例Caspase-3蛋白陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性率為90.00％(9/10)。Caspase-3蛋白在正常膀胱組織中的表達(dá)明顯高于膀胱癌,兩者相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.025)。Caspase-3蛋白在膀胱癌不同病理分級(jí)Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為:68.00％(17/25)、35.71％(10/28)、25.00％(3/

10、12),三組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.017);經(jīng)X2分割,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.0167,Ⅰ級(jí)與Ⅱ級(jí)之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.019),Ⅰ級(jí)與Ⅲ級(jí)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.014),Ⅱ級(jí)與Ⅲ級(jí)相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.768)。Caspase-3蛋白在膀胱癌不同臨床分期Tis-T1期、T2-T4期中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為:48.72％(19/39)、42.31(11/26),兩組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.612);Caspa

11、se-3蛋白在膀胱癌復(fù)發(fā)組、無(wú)復(fù)發(fā)組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為32.14％(9/28)、64.86(24/37),兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009)。3.在膀胱癌組織中,53例Livin蛋白陽(yáng)性表達(dá)中,有34例Caspase-3蛋白呈陰性表達(dá);12例Livin蛋白陰性表達(dá)中,有11例Caspase-3蛋白呈陽(yáng)性表達(dá);共同陽(yáng)性表達(dá)有19例,共同陰性表達(dá)的有1例。用皮爾遜積差相關(guān)(Pearson)作相關(guān)分析顯示:Livin蛋白與Caspa

12、se-3蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P=0.000,r=-0.434)。4.血管內(nèi)皮細(xì)胞染成棕黃色為CD34陽(yáng)性。以顯微鏡在400倍視野下選取5個(gè)血管數(shù)目最多的視野,計(jì)數(shù)血管數(shù),計(jì)算其平均數(shù)即為MVD。65例膀胱癌組織中的MVD為6.20~38.25個(gè)/高倍視野,平均值18.42±1.96。10例正常膀胱組織中的MVD為1.25~3.21個(gè)/高倍視野,平均值2.14±0.42。兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。MVD在膀

13、胱癌不同病理分級(jí)Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)中的平均值分別為:13.25±1.17、16.95±1.87、32.64±1.66,三組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05):Ⅰ級(jí)與Ⅱ級(jí)、Ⅰ級(jí)與Ⅲ級(jí)、Ⅱ級(jí)與Ⅲ級(jí)之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MVD在膀胱癌不同臨床分期Tis-T1期、T2-T4期中的平均值分別為:14.25±1.30、24.69±3.26,兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);MVD在膀胱癌復(fù)發(fā)組、無(wú)復(fù)發(fā)組中的平均值分別為:

14、22.63±2.61、12.86±1.15,兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。
　　結(jié)論：1.Livin蛋白在膀胱癌組織中呈高表達(dá),而在正常膀胱組織中無(wú)表達(dá)。Livin蛋白的表達(dá)可能與膀胱癌的病理分級(jí)、臨床分期無(wú)關(guān)系;而與腫瘤有無(wú)復(fù)發(fā)有關(guān)系,可以作為評(píng)價(jià)膀胱癌預(yù)后的指標(biāo)。2.Caspase-3蛋白在正常膀胱組織中呈高表達(dá),在膀胱癌組織中表達(dá)降低。Caspase-3蛋白的表達(dá)與臨床分期無(wú)關(guān)系;而與病理分級(jí)、腫瘤有無(wú)復(fù)發(fā)關(guān)系

15、密切。Caspase-3蛋白表達(dá)下調(diào)可能與膀胱癌的發(fā)生以及預(yù)后呈正相關(guān)。3.在膀胱癌組織中,Livin蛋白的表達(dá)與Caspase-3蛋白呈負(fù)相關(guān)。提示Livin通過(guò)抑制Caspase-3的活性,導(dǎo)致Caspase-3介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡不足可能是膀胱癌發(fā)生的機(jī)制之一。4.膀胱癌組織中MVD值明顯高于正常膀胱組織。MVD值在膀胱癌的不同病理分級(jí)、臨床分期以及腫瘤有無(wú)復(fù)發(fā)均有差異,提示其可以作為膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)行為的一個(gè)指標(biāo),來(lái)預(yù)測(cè)膀胱癌的復(fù)發(fā)風(fēng)