Nrf2與HO-1在實(shí)驗(yàn)性腦梗死大鼠腦組織中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及姜黃素腦保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：缺血性腦血管病是常見病、多發(fā)病，病死率和致殘率均較高。內(nèi)源性和外源性的親電子物質(zhì)引起的氧化應(yīng)激和細(xì)胞毒損傷是腦缺血繼發(fā)性腦損傷的重要機(jī)制之一。細(xì)胞內(nèi)許多氧化物質(zhì)增多，使活性氧族生成急劇增加，活性氧族具有強(qiáng)氧化性，可直接導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)對(duì)于降低氧化應(yīng)激引起神經(jīng)元的損傷至關(guān)重要，需要細(xì)胞啟動(dòng)多種防御機(jī)制保護(hù)神經(jīng)元免受由此帶來(lái)的損傷。近年來(lái)Nuclear factor erythroid 2-related fac

2、tor 2（Nrf2）/antioxidant response element（ARE）通路成為缺血性腦卒中的熱點(diǎn)之一，研究發(fā)現(xiàn)此通路是細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化及細(xì)咆毒防御機(jī)制之一，上調(diào)此信號(hào)通路可誘導(dǎo)多種抗氧化酶及解毒酶，加速酶促反應(yīng)，提高谷胱甘肽及超氧化物歧化酶等抗氧化物質(zhì)的表達(dá)水平，清除自由基等氧化物質(zhì)，維持細(xì)胞內(nèi)的正常電位水平，發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)成功建立了大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞（middle cerebral oc

3、clusion，MCAO）模型，測(cè)定了不同時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織中Nrf2及Ⅱ相酶血紅素加氧酶1（heme oxygenase-1，HO-1）的表達(dá)水平，并應(yīng)用姜黃素干預(yù)，觀察姜黃素對(duì)腦含水量、神經(jīng)功能缺損評(píng)分、梗死體積及Nrf2與Ⅱ相酶HO-1的表達(dá)的影響，探討Nrf2與Ⅱ相酶HO-1的動(dòng)態(tài)表達(dá)規(guī)律與姜黃素對(duì)缺血性腦組織的保護(hù)作用。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)分為兩部分：
　　 實(shí)驗(yàn)一，Nrf2及HO-1在大鼠腦組織中的動(dòng)態(tài)表達(dá)。采

4、用成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組（sham operated）和模型組（MCAO），參照Longa等的線栓法制作大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞模型，分別在術(shù)后3 h，6 h，12 h，24 h，48 h，72 h進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，2或3分者納入實(shí)驗(yàn)組，評(píng)分完畢將動(dòng)物斷頭處死，留取病變側(cè)腦組織，利用RT-PCR、免疫組織化學(xué)方法測(cè)定Nrf2及HO-1在mRNA及蛋白水平的動(dòng)態(tài)表達(dá)。
　　 實(shí)驗(yàn)二，姜黃素的腦

5、保護(hù)作用研究。采用成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組（sham operated）、溶劑對(duì)照組（vehicle-control）、姜黃素小劑量（50 mg/kg）組（CUR-L）及姜黃素大劑量（100 mg/kg）組（CUR-H）。MCAO術(shù)后15分鐘腹腔注射姜黃素溶液（50 mg/kg或100 mg/kg），溶劑對(duì)照組及假手術(shù)組給予同體積含0.1％DMSO的PBS。分別在術(shù)后24 h分別進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，完

6、畢將動(dòng)物斷頭處死，留取病變側(cè)腦組織進(jìn)行腦含水量測(cè)定，采用2％2，3，5-三苯基四唑氮紅（triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色觀測(cè)梗死體積，免疫組織化學(xué)、RT-PCR方法測(cè)定Nrf2及HO-1的表達(dá)情況，以及confocal microscope觀測(cè)不同組間Nrf2的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.MCAO組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)Nrf2及HO-1在mRNA及蛋白水平均高于sham組（P<0.

7、001），MCAO組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)相比，3 h表達(dá)開始升高，24 h達(dá)高峰（P<0.001），48 h及72 h有所回落，但與sham組相比仍較高。
　　 2.神經(jīng)功能評(píng)分：實(shí)驗(yàn)二中，MCAO后24 h采用改良的6分法進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。與vehicle-control組相比，CUR-H組明顯改善了神經(jīng)功能癥狀缺損（P<0.05），CUR-L組中沒有觀測(cè)到相似結(jié)果。
　　 3.腦組織含水量測(cè)定：sham組為77.68％±4：

8、0.36％，vehicle-control組為83.92％±1.08％，與vehicle-control組相比，CUR-H組降低了腦組織含水量（80.58％±0.41％），且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。而CUR-L組未觀察到此作用。
　　 4.梗死體積的測(cè)定：與vehicle-control組（％HLV：44.88±3.36）相比，CUR-H組明顯降低了梗死體積（％HLV：28.01±6.10），且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）

9、；CUR-L組與vehicle-control組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 5.CUR對(duì)Nrf2及HO-1表達(dá)的影響：與vehicle-control組及CUR-L組相比，CUR-H組中Nrf2及HO-1在mRNA及蛋白水平表達(dá)升高（P<0.05）。Confocal結(jié)果顯示，CUR-H組中Nrf2在神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞中的胞核和胞漿中均增加。
　　 結(jié)論：Nrf2及HO-1在大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞后的腩組織中