LncRNA ZSWIM8-AS1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、背景：
　　結(jié)直腸癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在逐年增高，死亡病例數(shù)也逐年上升。影響結(jié)直腸癌的預(yù)后因素很多，其中最主要的是腫瘤分期，Dukes’A期根治術(shù)后五年生存率超過90％，但Dukes’C期的患者則僅有30%左右。故早期發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌是提高患者生存率的關(guān)鍵。近年的研究表明，長(zhǎng)片段非編碼核糖核酸（LncRNA）在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要的調(diào)控功能，起著癌基因或抑癌基因的作用。某些LncRNA表達(dá)量在癌組織中

2、明顯升高或者降低，提示其與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展有一定聯(lián)系。基因芯片技術(shù)的快速發(fā)展為發(fā)現(xiàn)這些表達(dá)量異常的LncRNA提供了可能。故早期發(fā)現(xiàn)這些LncRNA，有望為結(jié)直腸癌的早期診斷、預(yù)測(cè)預(yù)后、個(gè)體化治療甚至基因治療提供新思路。
　　目的：
　　1.通過基因芯片技術(shù)檢測(cè)5對(duì)結(jié)直腸癌及癌旁正常組織中LncRNA表達(dá)譜，篩選出表達(dá)差異的LncRNA。
　　2.檢測(cè)LncRNAZSWIM8-AS1在結(jié)腸癌細(xì)胞株及結(jié)腸正常上皮細(xì)胞

3、株中的表達(dá)是否存在差異。
　　3.探討LncRNAZSWIM8-AS1在新鮮結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)水平及其與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。
　　4.檢測(cè)LncRNAZSWIM8-AS1在石蠟結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)水平，結(jié)合隨訪資料分析其與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系。
　　材料與方法
　　材料：
　　基因芯片篩選LncRNA的結(jié)直腸癌標(biāo)本（5對(duì)）,新鮮結(jié)直腸癌標(biāo)本（50例）。結(jié)直腸癌細(xì)胞

4、株（HT29、HCT116、SW480、LS174T）和正常大腸上皮細(xì)胞株（CCD841）。石蠟組織58例。
　　方法：
　　1.采用基因芯片技術(shù)從5對(duì)結(jié)直腸癌及癌旁正常組織中檢測(cè)出有顯著性差異的LncRNA。選取差異顯著的LncRNAZSWIM8-AS1；然后采用同一批標(biāo)本提取的RNA，運(yùn)用定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）方法檢測(cè)其表達(dá)，采用配對(duì)T檢驗(yàn)驗(yàn)證qRT-PCR結(jié)果與基因芯片結(jié)果是否相符。
　　2.

5、運(yùn)用qRT-PCR方法檢測(cè)LncRNAZSWIM8-AS1在結(jié)直腸癌細(xì)胞株（SW480、LS174T、HCT116和HT29）及正常大腸上皮細(xì)胞（CCD841）中的表達(dá)水平，并采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)分析其表達(dá)是否存在差異。
　　3.運(yùn)用qRT-PCR，檢測(cè)在50例結(jié)直腸癌組織和相應(yīng)癌旁正常組織中的表達(dá)水平，采用配對(duì)T檢驗(yàn)方法分析其表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。
　　4.運(yùn)用qRT-PCR，檢測(cè)在58例石蠟結(jié)直腸癌組織

6、和相應(yīng)癌旁正常組織中的表達(dá)水平，采用配對(duì)T檢驗(yàn)方法分析其表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系，并結(jié)合隨訪資料分析其與結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.基因芯片檢測(cè)結(jié)果，5對(duì)結(jié)直腸癌組織中表達(dá)差異的LncRNA共5751個(gè)（P<0.05，并且結(jié)直腸癌組織為癌旁正常組織表達(dá)量2倍及2倍以上或0.5倍及0.5倍以下），其中腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)的LncRNA2310個(gè)，表達(dá)下調(diào)的LncRNA3441個(gè)。選擇表達(dá)量高且差異在

7、2倍以上LncRNA篩選，結(jié)果LncRNAZSWIM8-AS1的表達(dá)水平是癌旁正常組織0.449050461倍（P<0.01）。
　　2.LncRNAZSWIM8-AS1在結(jié)直腸癌細(xì)胞株SW480、LS174T、HCT116和HT29中的相對(duì)表達(dá)倍數(shù)（2-ΔΔCt）是分別為0.465±0.016，0.422±0.040，1.179±0.168，0.949±0.076。LncRNAZSWIM8-AS1在SW480和LS174T細(xì)胞為

8、低表達(dá)，HCT116和HT29細(xì)胞較CCD841相差較小。獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)分析提示，與CCD841比較，LncRNAZSWIM8-AS1在SW480細(xì)胞中顯著低表達(dá)（P=0.004），LS174T顯著低表達(dá)（P=0.01）。但HCT116（P=0.181）和HT29（P=0.681）細(xì)胞無顯著性差異。
　　3.50例結(jié)直腸癌患者癌組織中LncRNAZSWIM8-AS1的相對(duì)癌旁正常組織表達(dá)量為0.593±0.540。結(jié)直腸癌組織中L

9、ncRNAZSWIM8-AS1的相對(duì)表達(dá)量低于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　4.LncRNAZSWIM8-AS1的表達(dá)水平與結(jié)直腸癌的腫瘤大小、淋巴結(jié)分期（N分期）、轉(zhuǎn)移分期（M分期）、pTNM分期（Ⅰ/ⅡvsⅢ/Ⅳ）顯著性負(fù)相關(guān)（allP<0.05），而與性別、年齡、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤分期（T分期）無顯著性相關(guān)（allP≥0.05）。
　　5.58例石蠟結(jié)直腸癌組織中LncRNAZSWIM8-AS1的

10、相對(duì)癌旁正常組織表達(dá)量為0.776±0.497。結(jié)直腸癌組織中LncRNAZSWIM8-AS1的相對(duì)表達(dá)量低于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　6.58例石蠟結(jié)直腸癌組織中LncRNAZSWIM8-AS1的表達(dá)水平與結(jié)直腸癌的腫瘤大小、轉(zhuǎn)移分期（M分期）、pTNM分期（Ⅰ/ⅡvsⅢ/Ⅳ）顯著性負(fù)相關(guān)（allP<0.05），而與性別、年齡、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤分期（T分期）、淋巴結(jié)分期（N分期）無顯著性相關(guān)（allP

11、≥0.05）。
　　7.LncRNAZSWIM8-AS1低表達(dá)的患者DFS較LncRNAZSWIM8-AS1高表達(dá)的患者DFS更短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.018）。HR（95%CI）1.88（1.10-3.20）
　　8.LncRNAZSWIM8-AS1低表達(dá)的患者OS較LncRNAZSWIM8-AS1高表達(dá)的患者OS更短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.037）。HR（95%CI）2.11（1.35-3.55）
　

12、　結(jié)論：
　　1.結(jié)直腸癌組織中LncRNAZSWIM8-AS1表達(dá)水平低于癌旁正常組織；
　　2.SW480及LS174T兩株結(jié)直腸癌細(xì)胞株中LncRNAZSWIM8-AS1的表達(dá)水平低于正常大腸上皮細(xì)胞；
　　3.LncRNAZSWIM8-AS1的表達(dá)水平與結(jié)直腸癌的腫瘤大小、淋巴結(jié)分期（N分期）、轉(zhuǎn)移分期（M分期）、pTNM分期（Ⅰ/ⅡvsⅢ/Ⅳ）顯著性負(fù)相關(guān)（allP<0.05），而與性別、年齡、組織學(xué)分級(jí)、腫

13、瘤分期（T分期）無顯著性相關(guān)（allP≥0.05）；提示LncRNAZSWIM8-AS1可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移有一定的相關(guān)性。
　　4.LncRNAZSWIM8-AS1在石蠟結(jié)直腸癌組織中表達(dá)水平與結(jié)直腸癌的腫瘤大小、轉(zhuǎn)移分期（M分期）、pTNM分期（Ⅰ/ⅡvsⅢ/Ⅳ）顯著性相關(guān)（allP<0.05），而與性別、年齡、組織學(xué)分級(jí)腫瘤分期（T分期）、淋巴結(jié)分期（N分期）無顯著性相關(guān)（P≥0.05）。
　　5.結(jié)直腸癌患者L