脊髓背角AKAP150與SNARE家族蛋白的相互作用及其調(diào)控.pdf

1、目的：興奮性谷氨酸受體通過胞吐作用（exocytosis）運(yùn)輸至細(xì)胞膜隨后進(jìn)入突觸，參與突觸傳遞和可塑性調(diào)節(jié)。胞吐作用依賴于 SNARE（Soluble Nethylmaleimide sensitive factor attachment protein recptor）家族蛋白介導(dǎo)的膜融合過程?，F(xiàn)已知，興奮性谷氨酸受體的突觸輸送及SNARE家族蛋白介導(dǎo)的胞吐作用均受到蛋白激酶A（PKA）及蛋白激酶C（PKC）的調(diào)控。A激酶錨定蛋白1

2、50（AKAP150）作為 PKA、PKC、蛋白磷酸酶2B（PP2B）的錨定蛋白，在這些激酶的定位、分布及其對(duì)底物的特異性作用中發(fā)揮著重要作用。本研究探討AKAP150與SNARE家族蛋白的相互作用，為深入研究AKAP150在介導(dǎo)興奮性受體胞吐中的作用奠定基礎(chǔ)。
　　方法：本研究采用免疫共沉淀（CO-IP）、Western Blot調(diào)查了小鼠脊髓AKAP150與SNARE家族蛋白的相互作用；并利用鞘內(nèi)注射N-甲基-D-天冬氨酸型谷

3、氨酸受體（NMDAR）激動(dòng)劑NMDA、PKA激動(dòng)劑forskolin、PKC激動(dòng)劑PMA，以及后足底皮下注射完全弗氏佐劑（Complete Freund's Adjuvant，CFA），探討了脊髓AKAP150與SNARE家族蛋白相互作用可能的調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　結(jié)果：（1）用抗AKAP150特異性抗體可從小鼠脊髓背角全細(xì)胞裂解液中免疫共沉淀出SNAP25、syntaixn3、Munc18-1。（2）用抗SNAP25特異性抗體可從全細(xì)

4、胞裂解液中免疫共沉淀出AKAP150；（3）用抗Munc18-1特異性抗體可免疫共沉淀出syntaxin3、SNAP25；用抗syntaxin3特異性抗體可免疫共沉淀出Munc18-1、SNAP25；抗SNAP25特異性抗體可免疫共沉淀出Munc18-1、syntaxin3，表明：在脊髓背角，由SNAP25、syntaixn3、Munc18-1可形成SNARE復(fù)合物，并與AKAP150相結(jié)合；（4）小鼠鞘內(nèi)注射NMDA（0.07μg）3

5、0min后，在脊髓背角裂解液中，用AKAP150抗體免疫共沉淀的Munc18-1、syntaixn3、SNAP25的量顯著減少，表明：激動(dòng)脊髓背角 NMDA受體可減弱 AKAP150與 SNARE復(fù)合物的相互作用；（5）鞘內(nèi)注射PKA激動(dòng)劑forskolin（2.5μg）后，用AKAP150抗體免疫共沉淀出的syntaixn3的量顯著減少，而共沉淀出的Munc18-1、SNAP25沒有明顯變化。（6）鞘內(nèi)注射PKC激動(dòng)劑PMA（1.0μ

6、g）后，用AKAP150抗體免疫共沉淀出的SNAP25與 syntaxin3的量顯著減少；（7）小鼠足底注射 CFA（10μl）一天后，用AKAP150抗體從脊髓裂解液中免疫共沉淀出的Munc18-1、syntaixn3、SNAP25的量均顯著減少，表明外周組織炎性損傷也可減弱AKAP150與SNARE蛋白的相互作用。
　　結(jié)論：脊髓背角AKAP150可特異性地與SNAP25、syntaixn3、Munc18-1形成的SNARE復(fù)