細胞周期進程中Cx43蛋白和AKAP95蛋白相互作用關(guān)系的研究.pdf

1、細胞的分裂和增殖依賴于細胞周期的精確調(diào)控。Cx43蛋白是一種可通過控制細胞周期來抑制腫瘤的蛋白。AKAP95蛋白與細胞周期密切相關(guān)，可與細胞周期蛋白相互結(jié)合。AKAP95蛋白是PKA的錨定蛋白，PKA可磷酸化Cx43蛋白的絲氨酸位點。
　　 為了研究細胞周期不同時相下AKAP95蛋白與Cx43蛋白的相互作用關(guān)系，選用了L-O2細胞和A549細胞。為實現(xiàn)細胞的同步化，選用了含羞草堿、阿菲迪霉素、噻氨酯噠唑和秋水仙堿四種細胞周期阻斷

2、試劑，分別將細胞阻斷于G1、S、G2和M期，同時用流式細胞術(shù)和細胞免疫熒光法測定四種試劑的阻斷效率。在A549細胞中，采用細胞免疫熒光方法觀察細胞不同時相下AKAP95蛋白與Cx43蛋白的定位和共定位，用免疫印跡和免疫共沉淀實驗來研究兩種蛋白在細胞周期各個時相下的表達量及相互作用關(guān)系。在L-O2細胞中，用免疫印跡和免疫共沉淀實驗來研究兩種蛋白在細胞周期各個時相下的定位、表達量及相互作用關(guān)系。通過實驗發(fā)現(xiàn)，Cx43蛋白和AKAP95蛋白在

3、兩種細胞中均存在相互作用關(guān)系，且相互作用主要存在于分裂期。兩種蛋白的定位和表達量隨著細胞周期的進行而發(fā)生變化，且在兩種細胞內(nèi)的變化不相同。
　　 為了研究PKA的活性對Cx43蛋白和AKAP95蛋白相互作用的影響，選用了PKA抑制劑H-89和PKA激活劑Foskolin分別處理A549細胞，細胞免疫熒光實驗進行檢測。經(jīng)過實驗發(fā)現(xiàn)PKA活性不改變A549細胞中AKAP95蛋白與Cx43蛋白的定位情況，但PKA活性可影響有絲分裂過程