EBI3蛋白與Sedlin蛋白相互作用的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩61頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的：為研究EBI3蛋白的生物學功能,構建帶有FLAG標簽的EBI3、帶GFP標簽的EBI3和帶有HA標簽的EBI3真核表達載體,瞬時轉染至COS7細胞,觀察表達的蛋白在細胞內的定位;將EBI3與Sedlin真核表達載體質粒共同瞬時轉染至COS7細胞,觀察各組蛋白在細胞內的共定位情況;將EBI3與Sedlin共同轉染至HEK293T細胞,用免疫共沉淀實驗檢測EBI3蛋白與Sedlin蛋白在哺乳動物細胞內的相互作用情況。
　　方法：

2、用PCR方法,以含人EBI3全長cDNA序列的質粒pGBKT7-EBI3為模板,擴增EBI3全長序列,酶切回收目的片段,插入到載體pCDNA3.1、pCDGFP上,構建真核表達載體pCDNA3.1-EBI3-FLAG、pCDGFP-EBI3和pCDNA3.1-EBI3-HA。用PCR方法,用引入了點突變的引物,以pCDNA3.1-EBI3-FLAG為模板,構建表達載體pCDNA3.1-D210A-FLAG。重組質粒經酶切鑒定正確的送測序

3、公司測序。
　　分別將pCDNA3.1-EBI3-FLAG和pCDGFP-EBI3質粒瞬時轉染至COS7細胞,在熒光顯微鏡下觀察各種蛋白的細胞定位;pCDNA3.1-EBI3-FLAG、pCDGFP-EBI3分別與pCDGFP-Sedlin、pCDNA3.1-Sedlin-FLAG共同轉染至COS7細胞,熒光顯微鏡下觀察各組蛋白在細胞內的共定位;將EBI3與Sedlin共同瞬時轉染至HEK293T細胞,通過免疫共沉淀實驗檢測EBI

4、3蛋白與Sedlin蛋白在哺乳動物細胞內的相互作用。
　　結果：經過酶切和測序鑒定,證明各質粒均構建正確。pCDNA3.1-EBI3-FLAG轉染至COS7細胞,在熒光顯微鏡下觀察到,EBI3蛋白主要分布在細胞質中,核內分布不明顯;pCDGFP-EBI3轉染至COS7細胞中,也可觀察到相同的結果。pCDNA3.1-EBI3-FLAG與pCDGFP-Sedlin共同轉染至COS7細胞中,免疫熒光顯微鏡觀察到,EBI3與Sedlin在

5、細胞質中有部分共定位。pCDGFP-EBI3與pCDNA3.1-Sedlin-FLAG共同轉染至COS7細胞中,免疫熒光顯微鏡觀察到,EBI3與Sedlin共定位主要在細胞質中,細胞核也可見部分共定位,共定位情況與pCDNA3.1-EBI3-FLAG與pCDGFP-Sedlin的共定位基本相同。pCDNA3.1-EBI3-FLAG與pCDGFP-Sedlin免疫共沉淀實驗表明,在HEK293T細胞中,EBI3蛋白與Sedlin蛋白存在相

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論