POT1蛋白相互作用蛋白的規(guī)?；l(fā)掘及相互作用網(wǎng)絡(luò)的初探.pdf

1、目的：以端粒保護(hù)蛋白POT1作為誘餌蛋白，大規(guī)模發(fā)掘它的相互作用蛋白，試圖構(gòu)建以POT1為中心的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，為肝臟蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建進(jìn)行初步的基礎(chǔ)性研究和原始數(shù)據(jù)積累。 方法：采用酵母雙雜交技術(shù)，以POT1為一級(jí)誘餌篩選相互作用蛋白，以篩選到的獵物蛋白作為二級(jí)誘餌蛋白再次進(jìn)行相互作用蛋白的篩選，再以二級(jí)誘餌篩選到的部分具有重要功能的獵物蛋白為三級(jí)誘餌蛋白，集中采用高通量酵母雙雜交方法大規(guī)模篩選成人肝cDNA文庫，得

2、到更多相互作用蛋白。采用生物信息學(xué)分析方法對(duì)所獲得數(shù)據(jù)進(jìn)行系統(tǒng)的分析，用Osprey軟件將結(jié)果視化，繪制相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖。 結(jié)果：在整個(gè)篩選過程中成功構(gòu)建了多個(gè)誘餌蛋白的酵母表達(dá)載體進(jìn)行級(jí)聯(lián)篩選，其中一級(jí)誘餌POT1篩選到 5 個(gè)新的相互作用蛋白 HSCK2B，LAMC3，SERTAD1，MVP，GEF，以它們?yōu)槎?jí)誘餌進(jìn)一步篩選到 TGM2，JAB1，HIVEP1，AGPAT2，CKAP4，HRSP12，CDC5L，RPS6

3、，ATF4，NF-κB1，SHANK3，MCPH1，NR4A1，GSDML20，最后以這20個(gè)蛋白為誘餌，利用高通量酵母雙雜交系統(tǒng)對(duì)成人肝cDNA文庫的篩選，共獲得236個(gè)相互作用蛋白，經(jīng)過回轉(zhuǎn)驗(yàn)證和生物信息學(xué)分析，最終得到107對(duì)高可信度的相互作用，基中102對(duì)為新發(fā)現(xiàn)的相互作用，這些相互作用構(gòu)成了一個(gè)錯(cuò)綜復(fù)雜的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)。 結(jié)論：篩選得到的236對(duì)相互作用，其中107對(duì)為高可信度相互作用，他們構(gòu)成了一個(gè)關(guān)系復(fù)雜的蛋白