規(guī)?；湍鸽p雜交技術平臺的建立及人CtBP2與CCNH蛋白相互作用的研究.pdf

1、復旦大學碩士學位論文規(guī)?；湍鸽p雜交技術平臺的建立及人CtBP2與CCNH蛋白相互作用的研究姓名：馬雅婷申請學位級別：碩士專業(yè)：遺傳學指導教師：霍克克20070430復旦大學碩士學位論文中文摘要本論文在建立了一種規(guī)?；慕湍鸽p雜交技術平臺的基礎上，利用該平臺分別進行了神經(jīng)退行性疾病相關蛋白及人類蛋白C t B P 2 的酵母雙雜交篩選；重點對人類C t B P 2 和C C N H 蛋白之間的相互作用進行了研究。為了研究人類肝臟中的蛋白

2、質(zhì)相互作用的連鎖網(wǎng)絡、從而揭示其功能和作用模式，我們探索建立了一種規(guī)?；慕湍鸽p雜交技術平臺。該平臺的特點是利用酵母接合的原理采用高通量自動化移液機器人系統(tǒng)進行規(guī)?；慕湍鸽p雜交篩選研究。為此，我們在對該平臺的無菌化操作、菌液點樣條件、自動化程序設置，數(shù)據(jù)采集和處理等方面進行了探索和優(yōu)化。在此基礎上，我們利用這個平臺對人類肝臟的1 5 3 6 個A D 克隆與1 2 4 8 個B D 克隆進行了規(guī)?；慕湍鸽p雜交篩選，得到了1 8 4

3、對相互作用，并對這些相互作用進行了初步的分析。神經(jīng)退行性疾病是神經(jīng)組織非正常退變引起的一類嚴重威脅人類生存質(zhì)量的重要疾病。為了研究該疾病發(fā)生發(fā)展的作用機理，我們選擇了四個與神經(jīng)退行性疾病相關的蛋白P R N P ，P S E N I ，B D N F 和G F A P 分別對上述1 0 0 0 個A D 克隆進行了酵母雙雜交篩選，共得到了7 5 對相互作用，并利用生物信息學軟件對這些相互作用進行了初步的分析．C t B P 2 是一種針

4、對多種轉錄物的輔阻遏因子。為了深入研究C t B P 2 的功能和的作用機制，我們以C t B P 2 為誘餌進行了酵母雙雜篩選，首次篩選發(fā)現(xiàn)了其與細胞周期蛋白C C N H 之間的相互作用。我們利用體外及體內(nèi)結合實驗，驗證了二者之間的相互作用，確定了結合的區(qū)域，并且首次發(fā)現(xiàn)C t B P 2 與C C N H 共定位于細胞核。二者的相互作用的發(fā)現(xiàn)為進一步研究它們的功能提供了新的線索。關鍵詞酵母雙雜交，蛋白質(zhì)．蛋白質(zhì)相互作用，神經(jīng)退行性