酵母雙雜交技術(shù)篩選與CUEDC2相互作用的蛋白質(zhì)及其功能研究.pdf

1、中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文酵母雙雜交技術(shù)篩選與CUEDC2相互作用的蛋白質(zhì)及其功能研究姓名：劉卉申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：張學(xué)敏20070510摘要酵母雙雜交技術(shù)篩選與CUEDC2相互作用的蛋白質(zhì)及其功能研究摘要CUEDC2(CUEdomaincomaining2)，是一個(gè)包含CUE結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，其生物學(xué)功能目lj『還不清楚。CUE結(jié)構(gòu)域由約40個(gè)氨基酸組成，能與泛素結(jié)合，廣泛存在于多種真核蛋白質(zhì)中。C

2、UE結(jié)構(gòu)域與單泛素、多泛素均存在相互作用，且發(fā)揮不同功能。泛素化是調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能的一種重要形式，是細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要調(diào)控機(jī)制。為了揭示CUEDC2的生物學(xué)功能，我們應(yīng)用酵母雙雜交篩選技術(shù)對CUEDC2相互作用蛋白質(zhì)進(jìn)行了篩選并對其功能進(jìn)行了初步研究。我們以CUEDC2基因全長作為誘餌，從人乳腺cDNA文庫中篩選與其相互作用的蛋白質(zhì)。我們從185個(gè)候選克隆中篩選出7個(gè)陽性克隆與CUEDC2存在相互作用。測序結(jié)果表明，這7個(gè)克隆分別為四種基

3、因來源：HomosapiensTHAPdomaincomaining，apoptosisassociatedprotein3(THAP3)；Homos印ienssuppressorofc”okinesignaling3(SOCS3)：Homosapiensapoptosisassociatedprotein，gro州harrestandDNAdamage—induciblegene34(GADD34)；HomosapiensIkBkin

4、asebeta(IKKp)。我們從人乳腺文庫中釣取了這四種蛋白質(zhì)的cDNA序列，為下一步的結(jié)構(gòu)和功能研究做好準(zhǔn)備。CUEDC2與四種蛋白質(zhì)之問的相互作用隨后通過體外的GSTpull—doum實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)得到了驗(yàn)證。為進(jìn)一步闡明CUEDC2的生物學(xué)功能，我們以酵母篩選結(jié)果為依據(jù)研究CUEDC2和GADD34相互作用的生物學(xué)意義。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，GADD34能夠促進(jìn)p53轉(zhuǎn)錄激活活性，我們首先利用雙熒光報(bào)告系統(tǒng)在真核細(xì)胞MCF7