應(yīng)用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與PITX2相互作用的蛋白.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、心房顫動(房顫,atrial fibrillation),是臨床上最常見并且危害嚴(yán)重的心律失常,其62％高遺傳率提示遺傳因子在房顫發(fā)生中起關(guān)鍵作用,但大部分房顫致病或易感基因還未發(fā)現(xiàn)。2007年,應(yīng)用全基因組關(guān)聯(lián)分析(GWAS)在冰島人群中首次發(fā)現(xiàn)位于4q25區(qū)域的SNPrs2200733與房顫高度關(guān)聯(lián),隨后在不同的群體研究中得到了驗證。與SNPrs2200733距離最近的已知基因是PITX2,該基因編碼一個轉(zhuǎn)錄因子蛋白,動物實驗已證實

2、PITX2在房顫發(fā)生中起關(guān)鍵作用,敲低PITX2在小鼠心臟中的表達容易誘發(fā)房顫表型,但其致病機理尚不完全清楚。因此,為深入解析房顫的分子遺傳學(xué)機制,本研究通過酵母雙雜交系統(tǒng)來篩選在心臟中與PITX2相互作用的蛋白,為研究PITX2的致病機理提供分子生物學(xué)基礎(chǔ)。
　　實驗首先以從ORIGENE公司購買的PITX2cDNA為模板,PCR擴增975bpPITX2c全長序列,構(gòu)建誘餌載體pGBKT7-PITX2。將誘餌載體轉(zhuǎn)化酵母細胞AH

3、109,未發(fā)現(xiàn)有細胞毒性以及自激活現(xiàn)象。隨后將已轉(zhuǎn)化誘餌載體的酵母細胞Y187與人心臟cDNA文庫進行Yeasting mating,通過營養(yǎng)缺陷型進行陽性克隆的篩選,后經(jīng)多次營養(yǎng)篩選、X-β-gal顯色反應(yīng)分析等來排除假陽性克隆,最后共得到286個陽性克隆。我們對其中100個克隆進行了測序,測序結(jié)果通過NCBI和UCSC數(shù)據(jù)庫中的BLAST工具進行同源比對,最后發(fā)現(xiàn)WDR6(Homo sapiens WD repeat-contain

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